[發明專利]核酸芯片、其制備方法及用途

有效

• 申請號: 200910210565.1
• 申請日: 2009-11-10
• 公開（公告）號: CN101696449B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 席建忠;黃巖誼
• 申請（專利權）人: 蘇州吉瑪基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/02;C40B40/06;C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種核酸芯片，包括基底，該基底的一部分表面附著有核酸分子，其特征在于所述基底上未附著核酸分子的區域被可抑制細胞生長的材料覆蓋，所述核酸分子被包裹在轉染載體中，通過轉染載體附著在基底表面，所述可抑制細胞生長的材料為聚-N-異丙基丙烯酰胺(Poly(N-isopropylacrylamide))；所述核酸芯片在加入細胞后培養兩到三天，將培養基溫度降低至室溫溶解并通過PBS清洗移去所述聚-N-異丙基丙烯酰胺，細胞可自組裝形成小島；所述核酸分子分布在基底表面多個彼此分立的區域內；所述多個彼此分立的區域排列成規則的點陣。

2.根據權利要求1所述的核酸芯片，其特征在于該材料層的厚度為1-500微米。

3.根據權利要求1或2所述的核酸芯片，其特征在于所述多個彼此分立的區域為圓形，其直徑在50微米-1毫米之間，彼此間距在50微米-10毫米之間。

4.根據權利要求1所述的核酸芯片，其特征在于所述核酸分子與轉染試劑形成核酸-轉染試劑脂質體被包裹在轉染載體中，通過轉染載體附著在基底表面。

5.根據權利要求4所述的核酸芯片，其特征在于所述轉染載體為在干燥條件下或培養液中能保護核酸或核酸-轉染試劑脂質體結構不被破壞的材料或混合物。

6.根據權利要求4或5所述的核酸芯片，其特征在于所述轉染載體為能在培養液中使得核酸或核酸-轉染試劑脂質體緩釋進入細胞的材料或混合物。

7.根據權利要求1所述的核酸芯片，其特征在于所述轉染載體為明膠(gelatin)、纖粘連蛋白(fibronectin)、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽(RGD)、透明質酸(Hyaluronic acid，HA)、瓊脂糖、水凝膠(hydrogel)、聚乳酸(polylactide，PLA)、聚乙二醇(Polyglycolide)、聚乳酸-羥基乙酸(Polylactide-glycolide，PLGA)、聚烯烴(polyolefins)、聚酯(polyesters)、聚酰胺(polyamides)、聚碳酸酯(polycarbonates)或聚砜樹脂(polysulfones)，或它們的混合物。

8.根據權利要求7所述的核酸芯片，其特征在于所述明膠的溶液濃度范圍為質量百分比0.05％到1％。

9.根據權利要求8所述的核酸芯片，其特征在于所述明膠中含有蔗糖或纖粘連蛋白(fibronectin)，其中蔗糖的摩爾濃度范圍為0.05M到1M，纖粘連蛋白的濃度范圍為質量百分比0.005％到0.05％。

10.根據權利要求1所述的核酸芯片，其特征在于所述核酸分子為DNA、siRNA、esiRNA、質?；蛞圆《拘问酱嬖诘妮d體。

11.根據權利要求1所述的核酸芯片，其特征在于所述基底的材料為玻璃、塑料、硅片或陶瓷。

12.一種制備根據權利要求1-11的任意一項所述的核酸芯片的方法，其特征在于其包括如下步驟：

1)將基底清洗干凈，干燥后在其表面制備可抑制細胞生長材料的圖案；

2)將核酸分子或核酸-轉染試劑脂質體包裹在轉染載體中；

3)將包裹核酸分子或核酸-轉染試劑脂質體的轉染載體固定到基底上未被可抑制細胞生長的材料覆蓋的區域中。

13.根據權利要求12所述的制備核酸芯片的方法，其特征在于步驟1操作方法如下：將基底清洗干凈晾干后，將可抑制細胞生長的材料溶于水、乙醇或其它溶劑中形成溶液，將所述溶液均勻覆蓋基底表面并干燥，然后將預先準備好的掩模覆蓋在所述可抑制細胞生長的材料上，將未被掩模遮蓋的部分刻蝕除去，露出基底。

14.根據權利要求13所述的制備核酸芯片的方法，其特征在于所述刻蝕為氧氣等離子體刻蝕。

15.根據權利要求12所述的制備核酸芯片的方法，其特征在于步驟1操作方法如下：將基底清洗干凈，干燥后，將可抑制細胞生長的材料溶于乙醇或水中形成溶液，利用壓印技術(stamp fabrication)直接在基底表面印出所需圖案。