[發明專利]人miR-485-5p反義核酸及其應用

有效

• 申請號: 200910204928.0
• 申請日: 2009-09-27
• 公開（公告）號: CN102031256A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發明（設計）人: 丁侃;張佩琢;東楠;李捷;沈孝坤
• 申請（專利權）人: 蘇州吉瑪基因藥物科技有限公司;中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;A61K48/00;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及生物醫藥領域。具體地，本發明涉及一種小分子microRNA(miRNA)的用途，尤其是涉及到該miRNA的反義寡聚核苷酸的應用。該反義寡聚核苷酸可與人miR-485-5p互補，從而抑制人miR-485-5p的表達。本發明還涉及含有該miRNA反義寡聚核苷酸的藥物組合物。

背景技術

miRNAs是小的非編碼RNA，長度為20-22bp，通常是由RNA聚合酶II(PolII)轉錄的，一般最初產物為大的具有帽子結構(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的pri-miRNA。這些pri-miRNA在RNase?III?Drosha和其輔助因子Pasha的作用下被處理成70個核苷酸組成的pre-miRNA前體產物。RAN-GTP和exportin?5將這種前體分子輸送到細胞質中。隨后，另一個RNase?III?Dicer將其剪切產生約為22個核苷酸長度的雙鏈。這種雙鏈很快被引導進入(miRISC)復合體中，其中含有Argonaute蛋白，并且成熟的單鏈miRNA保留在這一復合物中。成熟的miRNA結合到與其互補的mRNA的位點通過兩種依賴于序列互補性的機制負調控基因表達，與靶mRNA不完全互補的miRNA在蛋白質翻譯水平上抑制其表達。然而，最近也有證據表明，這些miRNA也有可能影響mRNA的穩定性。使用這種機制的miRNA結合位點通常在mRNA的3’端非翻譯區。如果miRNA與靶位點完全互補(或者幾乎完全互補)，那么這些miRNA的結合往往引起靶分子mRNA的降解。miRNAs在物種進化中相當保守，在動物，植物和真菌等中發現的miRNAs表達均有嚴格的組織特異性和時序性。

目前，只有很小一部分miRNAs的生物學功能得到闡明。這些miRNAs調節細胞生長和組織分化，與生物生長發育有關。一系列的研究表明：miRNAs在細胞生長和凋亡，血細胞分化，同源異形盒基因調節，神經元的極性，胰島素分泌，大腦形態形成，心臟發生，胚胎后期發育等過程中發揮重要作用。例如，miR-273參與線蟲的神經系統發育過程；miR-430參與斑馬魚的大腦發育；miR-181控制哺乳動物造血細胞分化為B細胞；miR-375調節哺乳動物胰島細胞發育和胰島素分泌；miR-143在脂肪細胞分化起作用；miR-196參與了哺乳動物四肢形成，miR-1與心臟發育有關。另有研究人員發現許多神經系統的miRNAs在大腦皮層培養中受到時序調節，表明其可能控制著區域化的mRNA翻譯。

miRNA表達與多種癌癥相關，并且這些基因可能起到腫瘤抑制基因或是癌基因作用。最先在B細胞慢性淋巴性白血病(CLL)中發現有miRNA表達水平的改變，隨后陸續在各種人類腫瘤中均檢測到miRNA表達水平的變化。研究發現，miRNAs與腫瘤形成相關，既能發揮腫瘤抑制基因的作用(如mir-15a和mir-16-1)，也能起到癌基因的作用(如mir-155和mir-17-92簇)。目前認為，在腫瘤細胞中，有些miRNA成熟體或前體表達水平異常，而表達異常的miRNA通過影響靶mRNA翻譯發揮作用，參與腫瘤形成過程，并起重要作用。如Ras原癌基因受let-7家族的調控，BCL2抗凋亡基因受miR-15a-miR-16-1簇調控，E2F1轉錄因子受miR-17-92簇調控，BCL6抗凋亡基因受miR-127的調控等。miRNAs的表達下調也和腫瘤發生有密切關系，這預示著miRNA具有癌基因的功能。例如，mir-143和mir-145在結腸癌中明顯下調。有趣的是，其發夾結構的前體分子在腫瘤和正常組織中含量相似，這表明，可能是由于其加工過程受到破壞。但是，mir-143和mir-145的腫瘤抑制基因功能可能不僅僅局限于結腸癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宮癌、淋巴癌等細胞系中其表達量也明顯下調。另一個報道表明，miR-21在膠質母細胞瘤中表達增加。這個基因在腫瘤組織中表達量比正常組織高5-100倍。