[發明專利]核糖核苷酸標記核酸檢測

有效

• 申請號: 200910203986.1
• 申請日: 2009-04-20
• 公開（公告）號: CN101649354A
• 公開（公告）日: 2010-02-17
• 發明（設計）人: K·A·鮑爾;D·H·蓋爾芬德;I·G·古特;F·莫杰
• 申請（專利權）人: 法國國家基因中心;霍夫曼-拉羅奇有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12M1/38;C12M1/34
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;付 磊

1.多核苷酸、核苷酸集以及核苷酸整合生物催化組分在制備用于檢測 靶核酸的方法中的試劑盒中的用途，其中

(i)多核苷酸包含5’部分和3’部分，所述5’部分包含一個或多個鄰接序列段， 其中每個序列段包含至少3個核苷酸堿基，并且每個序列段的5’-末端核苷酸堿 基在一個序列段內是獨特的并在每個序列段內是相同的；并且3’部分包含足以 與靶核酸雜交并在擴增條件下延伸的互補的序列段；

(ii)所述核苷酸集包含至少兩種脫氧核糖核苷酸(dNTP)形式的核苷酸堿 基，并且至少一種核苷酸堿基的大多數是核糖核苷酸(rNTP)形式，其中所述 的核糖核苷酸堿基與所述多核苷酸每個序列段的獨特5’核苷酸堿基互補；并且

(iii)所述核苷酸整合生物催化組分包含脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸整合 活性；

所述的方法包括：

(a)????將靶核酸與所述多核苷酸、所述核苷酸集以及所述核苷酸整合生 物催化組分接觸；

(b)????在一個或多個引物對的存在下在擴增條件下擴增靶核酸以產生包 含與所述多核苷酸5’-部分互補的3’序列段的擴增子，其中所述3’序列段包含一 個或多個鄰接序列段，其中每個序列段的3’-末端核苷酸堿基是具有與核苷酸集 中NTP相同的堿基的核苷一磷酸(NMP)；

(c)????將每個NMP3’的擴增子切割為片段，其中所述切割釋放作為個別 片段的序列段；以及

(d)????檢測擴增子片段，其中檢測的序列段片段指示靶核酸序列的擴增， 從而檢測靶核酸序列。

2.權利要求1的用途，其中所述方法包括使靶核酸序列與多核苷酸對 相接觸，其中多核苷酸對中的每個多核苷酸包含等質量的5’部分序列段。

3.權利要求1的用途，其中所述方法包括使靶核酸與至少一個多核苷 酸相接觸，其中來自多核苷酸互補體的序列段片段的檢測指示靶核酸序列中多 態性核苷酸的等位基因的存在。

4.權利要求1的用途，其中所述方法包括使靶核酸與至少兩個不同的 多核苷酸相接觸，其中多核苷酸的3’-部分僅在3’-末端核苷酸堿基上不同，其中 每個多核苷酸的3’-末端核苷酸堿基對應于具有獨特質量的序列段，并且來自至 少一個多核苷酸互補體的序列段片段的檢測指示靶核酸序列中多態性核苷酸的 等位基因的存在。

5.權利要求1的用途，其中使許多不同靶核酸序列與許多不同多核苷 酸相接觸，每個不同的多核苷酸包含獨特質量的序列段，其中多核苷酸的序列 段是所述許多不同靶核酸序列之一的鑒定劑，由此，從至少一個多核苷酸的互 補體中檢測到序列段片段指示所述許多不同靶核酸序列的至少一個的存在。

6.權利要求1的用途，其中所述多核苷酸包含阻止多核苷酸延伸的封 閉部分，并且所述的方法進一步包括在擴增前從所述多核苷酸去除封閉部分的 步驟。