[發明專利]穩定劑海藻糖在豬戊肝診斷試劑盒中的應用

無效

• 申請號: 200910201070.2
• 申請日: 2009-12-14
• 公開（公告）號: CN101710120A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: 趙凱;劉啟文;李震;于瑞嵩;唐雪明;朱宏;譚芙蓉;吳瀟;王金斌;陶世如;蔣玲曦
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 費開逵

技術領域

本發明涉及一種穩定劑海藻糖在豬戊肝診斷試劑盒中的應用。

背景技術

戊型肝炎病毒(Hepatitis?E?virus，HEV)是一種經糞口途徑傳播的非甲-非乙型肝炎病毒，可以在人群引起暴發流行，主要侵害青壯年，在孕婦可造成20％的病死率，1986-1988年我國新疆南部地區因飲水污染導致戊型肝炎流行，共計發病119280例，死亡707例，是迄今世界上最大的一次戊型肝炎流行。近年來戊型肝炎發病率有逐年增加的趨勢，據我國衛生部統計，戊肝發病率2003年比2002年上升40.4％。因此，戊肝防控已列入各級公共衛生機構的工作日程。

近年來研究發現：HEV可以感染豬、牛、羊、鼠、雞等，在豬和鼠的抗體陽性率高于50％，由此推測動物是HEV傳播的重要中間宿主。基因序列分析表明：從動物體內分離的戊型肝炎病毒與人的HEV有極高的基因同源性，并且已有人食用野豬肉和鹿肉而感染戊肝的報道，證明戊肝是一種可以通過食物傳播的人畜共患疫病。葛勝祥等(2003)對我國20個省、市、自治區的120個養豬場的8626只成年豬進行了HEV血清學調查，結果表明平均感染陽性率為83.4％，其中最高省份為內蒙古(100％)，最低為湖北(68％)。鑒于我國HEV居高不下的感染率，對豬戊肝病毒的表位進行研究，建立特異、有效的豬戊肝檢測方法，研制安全、有效的豬戊肝疫苗，了解的流行發病規律，阻斷該病由豬向人的傳播，對于保證人民的健康安全意義重大。

近年來，越來越多的戊型肝炎診斷試劑盒被研制開發出來。評價診斷試劑盒的標準應包括靈敏度、特異性、精密性及穩定性等方面。其中穩定性為評價該診斷試劑的重要指標，即試劑制備后，經過一段時間貯存和運輸，活性是否改變，是試劑內在質量的重要方面。先進的酶聯試劑盒抗原預包被在微孔板上，酶結合物稀釋至工作濃度，顯色劑配成液體，以上三種成份活性易丟失。如何使其穩定是一重要研究課題，有關這方面的報道甚少。戎廣亞等【戎廣亞，孫杰，周繼文等，新型戊型肝炎診斷試劑盒的研制及其應用，中國病毒學，1998，13(1)：64-69】對人戊型肝炎診斷試劑盒中的封閉液和酶結合物稀釋的穩定性進行研究，結果證明：海藻糖加入封閉液中可有效地保護戊肝抗原活性，海藻糖加入酶結合物中可以使稀釋至工作濃度的HRP-羊抗人IgG活性穩定。但是，到目前為止，還沒有穩定劑海藻糖在豬戊肝診斷試劑盒的應用報道。

雖然豬戊肝研究越來越得到科學界的重視，但目前國內外對豬戊肝的研究多限于局部區域的流行病學調查和一些簡單的動物感染試驗，在豬戊肝防控研究方面尚有以下有待回答問題和技術瓶頸。即目前還沒有豬戊肝病毒的表位研究報道，市場上用于豬戊肝檢測的試劑盒是用于人戊肝檢測的試劑盒，雖然豬戊肝病毒與人戊肝病毒序列同源性很高，但是他們之間畢竟還是有些差別，用人的戊肝病毒表位來檢測豬戊肝病毒就特異不高，不能特異反映出豬戊肝流行規律。因此研制穩定、快速、特異豬戊肝診斷試劑盒，一方面可以用于豬戊肝流行的監控；另一方面也可以控制豬戊肝的流行，阻斷戊肝由豬向人傳播打下堅實的基礎，對于保證人民的健康安全意義重大。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種穩定劑海藻糖在豬戊肝診斷試劑盒中的應用，利用穩定劑海藻糖能在酶結合物稀釋液保持穩定的功能，來維持豬戊肝病毒試劑盒的穩定性。

本發明所述的豬戊肝病毒試劑盒以Zhao?Kai等【Zhao?Kai，Liu?Qiwen，Yu?Ruisong，et?al.Screening?of?specific?diagnostic?peptides?of?swine?hepatitis?Evirus-Virol?J，2009，6：186-doi：10.1186/1743-422X-6-186.】篩選出來的來自豬HEV?swCH25的合成多肽swHEV11作為包被抗原制作而成，其制備方法如下：

抗原稀釋：取10ul濃度為10mg/ml的多肽(將5mg合成的多肽溶解在0.5ml二甲基亞砜(DMSO)而得)與90ul?PBS液混勻，得到的抗原稀釋液溶度為1ug/ul。再取15ul抗原稀釋液與5ml包被液混勻，得到的抗原稀釋溶度為3ug/ml。在酶標板上加入抗原稀釋溶度100ul/孔，4℃包被12h。

封閉：吸去包被夜，每孔加入200ul封閉液于37℃封閉2h后，用TBST液洗板3次后，拍干，將酶標板封好放入4℃下，以備后用。

所述豬戊肝病毒試劑盒的主要成分為：