[發明專利]一種采用不同接種方式來提高紅樹林內生真菌產抗癌蒽醌類化合物產量的方法

有效

• 申請號: 200910199117.6
• 申請日: 2009-11-20
• 公開（公告）號: CN101701230A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發明（設計）人: 周祥山;張元興;余超;康麗;孫學謙;鄒武
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12P15/00
• 分類號: C12P15/00;C12P7/66;C12R1/77
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄧琪

技術領域

本發明涉及通過六種接種方式培養種子從而提高紅樹林內生真菌 Fusarium?proliferatum(No.1403)產蒽醌類抗癌化合物1403C產量的方法。

背景技術

紅樹林內生真菌(Endophytic?fungi)1403#為Fusarium?proliferatum.，來自 中國南海紅樹林樹葉內部，由香港城市大學Vrijmoed教授等分離得到。中山大 學林永成教授帶領的研究組已從其發酵液中分離出20多種化合物，包括灰黃 霉素(Griseofulvin)和多種蒽醌(Anthraquinone)、萘醌(Naphthoquinone) 和咕噸酮(Xanthone)類等物質，這些化合物大多具有抗腫瘤、抗菌活性。1403C 是已分離化合物中的一種結構新穎的蒽醌類化合物(姜廣策林永成周世寧 等.中國南海紅樹林內生真菌No.1403次級代謝物研究[J].中山大學學報(自然 科學)，2000，39(6)：68-72)，經中山大學黎孟楓教授等評定，該物質能明 顯抑制體外培養的多種腫瘤細胞系且毒副作用小。

在Fusarium?proliferatum(No.1403)的搖瓶發酵中，采用常規的接種及發酵 方式，1403C產量極低(約為1.3mg/L，見姜廣策林永成周世寧等.中國南海 紅樹林內生真菌No.1403次級代謝物研究[J].中山大學學報(自然科學)，2000， 39(6)：68-72)，難以滿足進一步的藥理藥效研究，因此有必要提高1403C的 發酵產量，為開發新型、高效、低毒的抗腫瘤候選藥物奠定基礎。本發明旨 在通過對接種方式的優化，以期獲得高產量的1403C。

發明內容

本發明的主要目的在于解決1403C產量過低的問題，提供了不同的接種方 式來培養種子從而提高1403C產量。

為了解決上述問題，本發明采用的技術路線如下：

一種通過改變接種方式來提高1403C產量的方法，利用海洋絲狀內生真菌 Fusarium?proliferatum(No.1403).CCTCC?M201018，采用不同的接種方式來培 養種子，從而獲得較高產量的1403C。

所述的不同的接種方式是通過帶擋板的錐形瓶培養種子進行研磨接種、 帶擋板的錐形瓶培養的種子直接接種或者在普通錐形瓶中加入一到十顆玻璃 珠培養種子進行接種。

在普通錐形瓶中加入一到十顆玻璃珠培養種子進行接種時，在上述普通 錐形瓶中加入一到十顆玻璃珠，裝入種子培養基，經常規滅菌，從斜面培養 基上挑取生長良好的種子接入上述瓶中。加入的玻璃珠的直徑推薦為1-10mm， 進一步推薦1-3mm。

采用帶擋板的錐形瓶培養種子進行研磨接種或者帶擋板的錐形瓶培養的 種子直接接種時，在上述帶擋板的錐形瓶中裝入種子培養基，經常規滅菌， 從斜面培養基上挑取生長良好的種子接入上述瓶中，待種子生長好，進行或 不進行無菌研磨。所述的帶擋板的錐形瓶中的擋板推薦為1～6塊，進一步推薦 帶擋板的錐形瓶中的擋板為3塊。所述的錐形瓶推薦為500ml的，所述的帶擋 板的錐形瓶中擋板的位置推薦瓶中擋板中心離瓶口13-19cm，離瓶底部 0.1-1cm，擋板軸向葉端寬度0.1-2cm，較佳的范圍18.4-18.6cm，離瓶底部 0.4～0.6cm，擋板軸向葉端寬度0.8-1cm。例如擋板中心離瓶口18.5cm，離瓶 底部0.5cm，擋板軸向葉端寬度0.9cm。上述帶擋板的錐形瓶中的擋板與瓶子 主體為一體吹制而成。

具體例如：

M1：采用帶有三個擋板的500mL錐形瓶，裝入100mL種子培養基，經121 ℃、20min滅菌，從斜面培養基上挑取生長良好的種子接入上述瓶中。待種子 生長好，進行無菌研磨。

M2采用帶有三個擋板的500mL錐形瓶，裝入100mL種子培養基，經121 ℃、20min滅菌，從斜面培養基上挑取生長良好的種子接入上述瓶中。

M3采用無擋板的500mL普通錐形瓶，加入十顆玻璃珠，裝入100mL種 子培養基，經121℃、20min滅菌，從斜面培養基上挑取生長良好的種子接入 上述瓶中。

M4采用無擋板的500mL普通錐形瓶，加入六顆玻璃珠，裝入100mL種 子培養基，經121℃、20min滅菌，從斜面培養基上挑取生長良好的種子接入 上述瓶中。