[發明專利]一種重組單純皰疹病毒遺傳操作系統及其應用

無效

• 申請號: 200910198576.2
• 申請日: 2009-11-10
• 公開（公告）號: CN102051379A
• 公開（公告）日: 2011-05-11
• 發明（設計）人: 田聆;方煜翔;薛京倫;陳金中
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/869
• 分類號: C12N15/869;C12N7/00;C12N7/01
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴;包兆宜

1.一種重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，該重組單純皰疹病毒遺傳操作系統包括HSV骨架載體和穿梭質粒；所述的HSV骨架載體包含HSV基因組DNA、BAC質粒骨架、多克隆位點、真核抗性基因以及原核抗性基因，在多克隆位點和真核抗性基因的外側融入位點特異性重組酶系統識別序列；所述的穿梭質粒是包含多克隆位點的細菌克隆載體，并且在多克隆位點外側融入位點特異性重組酶系統識別序列。

2.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，所述的位點特異性重組酶系統識別序列是LoxP序列、FRT序列、attP或attB序列中的一種或者幾種。

3.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，所述的多克隆位點含有以下一種或者幾種酶切位點：HindIII、EcoRI、SacI、KpnI、EcoRV、NotI、SphI、NcoI、XhoI、SmaI、PacI、NheI、BamHI、PmeI或者SalI。

4.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，所述的原核抗性基因是氯霉素抗性基因或者四環素抗性基因。

5.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，所述的真核抗性基因是卡那霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、新霉素抗性基因或者吉歐霉素抗性基因中的一種或者幾種。

6.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，該重組單純皰疹病毒遺傳操作系統還包括重組酶。

7.根據權利要求6所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統，其特征在于，所述的重組酶是Cre酶、FRT酶、C31或者BTl整合酶。

8.根據權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統的制備方法，其特征在于，首先，構建同源重組前體質粒，該質粒包含多克隆位點MCS、熒光蛋白基因、真核抗性基因以及原核抗性基因，在MCS和真核抗性基因的外側融入位點特異性重組酶系統識別序列；其次，同源重組前體質粒pRKBAC-MCS中插入了HSV基因組的兩條同源臂DNA；再次，構建穿梭質粒，在細菌克隆載體的多克隆位點MCS2外側融入位點特異性重組酶系統識別序列。

9.權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統在構建復制缺陷型的重組單純皰疹病毒中的應用。

10.權利要求1所述的重組單純皰疹病毒遺傳操作系統在構建選擇復制型的溶瘤單純皰疹病毒中的應用。