[發明專利]GPR116基因及其編碼的受體蛋白和應用

無效

• 申請號: 200910197004.2
• 申請日: 2009-10-12
• 公開（公告）號: CN102041259A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 羅劍;汪秀;劉明耀;唐小龍;金蓉蓉
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/68;G01N33/68;A61K48/00;A61P35/00;A61P15/14;C12R1/19
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種分離出的DNA分子，其特征在于，它包括：編碼具有人GPR116蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，而且所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第290-4330位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第290-4330位的核苷酸序列雜交。

2.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列的多肽。

3.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于，該序列具有SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第290-4330位的核苷酸序列。

4.一種載體，其特征在于，它包含權利要求1所述的DNA。

5.一種由權利要求4所述載體按照經典生物學方法轉染和轉化的宿主細胞，包括原核細胞和真核細胞。

6.一種用于PCR擴增GPR116全長的引物，具有如SEQ?ID?NO.12和13所示的序列。

7.一種用于構建針對GPR116的siRNA表達載體的人工合成寡核苷酸序列，具有如SEQ?ID?NO.8和9所示的序列，和用于構建針對與哺乳動物無序列同源性的對照siRNA表達載體的人工合成寡核苷酸序列序列，具有如SEQ?ID?NO.10和11所示序列。

8.一種用于合成針對GPR116的發夾siRNA的寡聚核苷酸序列，具有如SEQ?ID?NO.4和5所示序列，和用于合成與哺乳動物無序列同源性的對照發夾siRNA的寡聚核苷酸序列，具有如SEQ?ID?NO.6和7所示序列。

9.GPR116基因作為乳腺癌診斷標志物的應用，其特征在于：惡性乳腺癌細胞中GPR116強表達，而良性乳腺癌細胞中GPR116低表達，正常乳腺組織細胞中無GPR116表達。GPR116表達強度的無、弱和強的定義用光密度數值劃分，把光密度數值小于0.1的定義為無表達，0.2-0.5之間為弱表達，大于0.5的為強表達。由于GPR116的N末端能被水解酶水解成很多片段，釋放進入血液，因此病人的血清也可以作為利用GPR116診斷其乳腺癌測試樣品之一。

10.一種用于診斷和治療乳腺癌的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片的載體上含有下列序列：

(I)-(iv)的序列或者它們的連續片段，

(i)SEQ?ID?NO：1所示的編碼序列；

(ii)與SEQ?ID?NO：1中的290-4330位核苷酸序列至少有70％同源性的序列；

(iii)在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO：1中的290-4330位核苷酸雜交的序列；

(iv)具有與SEQ?ID?NO.2所示氨基酸序列至少70％同源性的序列；

11.一種多核苷酸序列在制備治療乳腺癌的藥物中的應用，其特征在于，所述的多核苷酸是具有SEQ?ID?NO：1所示的編碼序列，或者與SEQ?ID?NO：1中的290-4330位核苷酸序列至少有70％同源性的序列，或者在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO：1的290-4330位核苷酸序列雜交的序列。

12.如權利要求12所述的一種多核苷酸序列在制備治療乳腺癌的藥物中的應用，其特征在于，所述的多核苷酸編碼具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列的多肽。

13.一種篩選用于治療或預防乳腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：

a)使候選化合物與表達GPR116的細胞接觸。

b)選出這樣的候選化合物，其中，與不存在該候選化合物時檢出的GPR116的表達水平相比，該候選化合物降低GPR116的表達水平。

14.權利要求10的方法，其中所述細胞包括乳腺癌細胞。

15.一種篩選用于治療或預防乳腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：

a)使候選化合物與導入了載體的細胞接觸，其中所述載體含有GPR116的轉錄調控區及在該轉錄調控區的調控下表達的報告基因。

b)測定所述報告基因的表達水平或活性。

c)選擇這樣的候選化合物，該候選化合物降低所述報告基因的表達水平或活性。