[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)丁二醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910196877.1
• 申請日: 2009-10-09
• 公開（公告）號: CN102041278A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 翟育明
• 申請（專利權(quán)）人: 翟育明
• 主分類號: C12P7/18
• 分類號: C12P7/18;C12R1/43
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，包括如下步驟，

(1)采用種子培養(yǎng)基活化粘質(zhì)沙雷氏菌

種子培養(yǎng)基中的組分按重量百分比為，葡萄糖0.5～1.5％，酵母粉0.01～1％，蛋白胨0.01～1％，硫酸銨0.1～1％，磷酸二氫鉀30～50％，氯化鈉0.01～0.1％，硫酸鎂0.01～0.1％，水為余量；滅菌后接種前用無菌的氫氧化鈉溶液將搖瓶種子液調(diào)至pH?6.5～7.8，把甘油管保藏的種子接入種子培養(yǎng)基中；在溫度為28～32℃，轉(zhuǎn)速185～195r/min條件下，搖瓶培養(yǎng)12小時，以5％的接種量轉(zhuǎn)接一次，同樣的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)；

(2)在搖瓶培養(yǎng)中，搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中的組分按重量百分比為，蔗糖8～10％，蔗糖單獨配制以及單獨滅菌，蛋白胨1～3％，酵母粉0.1～1％，檸檬酸0.1～2％，硫酸錳0.001～0.1％，磷酸二氫鉀0.01～0.1％，硫酸鎂0.01～0.1％，硫酸亞鐵0.00001～0.01％，水為余量；滅菌前用氫氧化鈉溶液將發(fā)酵液調(diào)至pH為6.5～7.8；將種子液以4～6％的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；發(fā)酵過程中后期以45～55％的蔗糖水溶液補料，使發(fā)酵液中蔗糖的濃度控制在0～20g/l，0～15h補入干重為0～1.2g的菌體，pH在9小時時調(diào)至5.8～6.2，通過硫酸溶液和氫氧化鈉溶液維持pH在5.8～6.2，在溫度為28～32℃，轉(zhuǎn)速185～195r/min，進(jìn)行下發(fā)酵培養(yǎng)30～38小時，可得含有2，3-丁二醇的發(fā)酵培養(yǎng)液；

在3.7L生物反應(yīng)器培養(yǎng)中，3.7L生物反應(yīng)器發(fā)酵培養(yǎng)基中的組分按重量百分比為，蔗糖5～15％，蔗糖單獨配制以及單獨滅菌，蛋白胨1～3％，酵母粉0.1～1％，檸檬酸0.1～2％，硫酸錳0.001～0.1％，磷酸二氫鉀0.01～0.1％，硫酸鎂0.01～0.1％，硫酸亞鐵0.00001～0.01％，醋酸鉀0.1～1％，硝酸鈉0.01～1％，水為余量；滅菌前用氫氧化鈉溶液將發(fā)酵罐中的發(fā)酵液調(diào)至pH為6.5～7.8；3.7L生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度為28～32℃，通氣流量0.5～1.5vvm，氣壓0.1～0.2；轉(zhuǎn)速前6小時控制在450rpm，后每小時增加50轉(zhuǎn)，至10小時達(dá)到650rpm，維持到18小時，18小時后每5小時降低50rpm，降低到400rpm時維持至發(fā)酵結(jié)束，蔗糖濃度通過流加維持在4.8～5.2g/L；15小時時補入干重為2g搖瓶菌體，pH在9小時時調(diào)至5.8～6.2，通過磷酸溶液和氫氧化鈉溶液維持pH在5.8～6.2，發(fā)酵培養(yǎng)37～50小時，可得含有2，3-丁二醇的發(fā)酵培養(yǎng)液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(1)中，

所述的種子培養(yǎng)基中的組分按重量百分比優(yōu)選為，葡萄糖1％，酵母粉0.1％，蛋白胨0.2％，硫酸銨0.6％，磷酸二氫鉀41％，氯化鈉0.05％，硫酸鎂0.05％，水57％；滅菌后接種前用無菌的氫氧化鈉溶液將搖瓶種子液調(diào)至pH值優(yōu)選為7.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(1)中，溫度優(yōu)選為30℃，轉(zhuǎn)速優(yōu)選為190r/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(2)中，在搖瓶培養(yǎng)中，

所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中的組分按重量百分比優(yōu)選為，蔗糖9％，蔗糖單獨配制以及單獨滅菌，蛋白胨2％，酵母粉0.5％，檸檬酸1％，硫酸錳0.01％，磷酸二氫鉀0.05％，硫酸鎂0.05％，硫酸亞鐵0.002％，水87.388％；滅菌前用氫氧化鈉溶液將發(fā)酵液調(diào)至pH值優(yōu)選為7.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(2)中，在搖瓶培養(yǎng)中，溫度優(yōu)選為30℃，轉(zhuǎn)速優(yōu)選為190r/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(2)中，在3.7L生物反應(yīng)器培養(yǎng)中，

所述的3.7L生物反應(yīng)器發(fā)酵培養(yǎng)基中的組分按重量百分比優(yōu)選為，蔗糖9％，蔗糖單獨配制以及單獨滅菌，蛋白胨2％，酵母粉0.5％，檸檬酸1％，硫酸錳0.01％，磷酸二氫鉀0.05％，硫酸鎂0.05％，硫酸亞鐵0.002％，醋酸鉀0.6％，硝酸鈉0.2％，水86.588％；滅菌前用氫氧化鈉溶液將發(fā)酵罐中的發(fā)酵液調(diào)至pH值優(yōu)選為7.2。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)丁二醇的方法，其特征在于，在其步驟為(2)中，在3.7L生物反應(yīng)器培養(yǎng)中，

所述的3.7L生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度優(yōu)選為30℃，通氣流量1vvm，氣壓0.15。