[發(fā)明專利]一種利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)豬瘟細(xì)胞活疫苗的方法及其制品

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910193314.7
• 申請日: 2009-10-26
• 公開（公告）號: CN101695571A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳文福;張毓金;林旭野;岑小清;任向陽;游啟有;張木輝;周澤標(biāo);劉秋燕;司徒劍謀
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東永順生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/187
• 分類號: A61K39/187;A61P31/14;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，更具體是涉及一種利用生物反應(yīng)器生 產(chǎn)豬瘟細(xì)胞活疫苗的方法及其制品。

背景技術(shù)

當(dāng)前豬瘟細(xì)胞活疫苗的生產(chǎn)主要是轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞培養(yǎng)的傳統(tǒng)培養(yǎng)方式，該培養(yǎng) 方式是培養(yǎng)細(xì)胞貼壁生長于玻璃培養(yǎng)瓶的內(nèi)壁上，雖然其操作技術(shù)要求較低和 技術(shù)成熟穩(wěn)定；但轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)使用數(shù)十年，與當(dāng)前大規(guī)模動物疫苗生產(chǎn) 不相適應(yīng)，主要表現(xiàn)為：(1)轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞培養(yǎng)，不能做到培養(yǎng)條件適時調(diào)整，無 法保證細(xì)胞培養(yǎng)處于最佳條件，培養(yǎng)細(xì)胞密度小，培養(yǎng)病毒滴度低，動物的免 疫效果差；(2)轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞碎片與雜蛋白多，疫苗的雜質(zhì)多，導(dǎo)致免 疫動物的副反應(yīng)大；(3)轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞批間差異較大，產(chǎn)品質(zhì)量不均一、 不穩(wěn)定；(4)轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞培養(yǎng)，生產(chǎn)效率低，生產(chǎn)成本高。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)豬瘟 細(xì)胞活疫苗的方法及豬瘟細(xì)胞活疫苗產(chǎn)品。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先提供了一種利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)豬瘟細(xì)胞活 疫苗的方法，該方法包括如下步驟：

(1)用細(xì)胞生長液培養(yǎng)制苗用細(xì)胞；

(2)將所述步驟(1)得到的細(xì)胞接種含豬瘟兔化弱毒毒種的維持液，并進(jìn) 行繁殖培養(yǎng)；

(3)接毒后1～3日或流加方式收獲所述步驟(2)得到的細(xì)胞培養(yǎng)毒液；

(4)在所述步驟(3)得到的細(xì)胞培養(yǎng)毒液中加穩(wěn)定劑和抗生素，經(jīng)冷凍真 空干燥得到豬瘟細(xì)胞活疫苗；

其中，上述方法中使用了含微載體的生物反應(yīng)器進(jìn)行培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述步驟(1)包括如下步驟：將所述生物反應(yīng)器和微載體經(jīng)消毒 后接種所述制苗用細(xì)胞，并加入細(xì)胞生長液進(jìn)行培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述步驟(2)包括如下步驟：將所述生物反應(yīng)器接種所述含豬瘟 兔化弱毒毒種的維持液，繼續(xù)培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述步驟(1)和(2)中的培養(yǎng)溫度為36℃～37℃。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中的細(xì)胞生長液含90％～92％體積百分比的MEM 液、抗菌素和8％～10％體積百分比的犢牛血清，所述細(xì)胞生長液的pH值為7.0～ 7.2。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中的接種時的接種量為1％～2％體積百分比的生產(chǎn) 用細(xì)胞毒種的維持液。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中的細(xì)胞維持液含95％～98％體積百分比的MEM 液、抗菌素和2％～5％體積百分比的犢牛血清，所述細(xì)胞維持液的pH值為7.2～ 7.4。

優(yōu)選的，所述生物反應(yīng)器為TideCell固定床微載體生物反應(yīng)器。TideCell生 物反應(yīng)器可達(dá)到簡化至只需一般針筒以及無血清培養(yǎng)細(xì)胞方式，培養(yǎng)之載體細(xì) 胞均勻分布成長，其有效量產(chǎn)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，一個TideCell生物反應(yīng)器，產(chǎn)能約 一般傳統(tǒng)生物反應(yīng)器的4倍。

優(yōu)選的，所述制苗用細(xì)胞為豬睪丸細(xì)胞系ST、豬腎細(xì)胞系PK15或豬腎細(xì)胞 系IBRS-2。

本發(fā)明的目的之二是提供一種豬瘟細(xì)胞活疫苗制品，該豬瘟細(xì)胞活疫苗通過 上述方法得到。

本發(fā)明利用生物反應(yīng)器大規(guī)模高密度培養(yǎng)技術(shù)，可最大限度地提高生物反 應(yīng)器中單位體積細(xì)胞生長密度，在病毒疫苗生產(chǎn)中具有很大潛力和優(yōu)勢，具體 表現(xiàn)為：(1)細(xì)胞密度大大增加，病毒濃度極大提高；(2)疫苗效價提高，副 反應(yīng)減小；(3)降低勞動強(qiáng)度，減少生產(chǎn)成本；(4)疫苗生產(chǎn)可監(jiān)控性提高；(5) 保證產(chǎn)品質(zhì)量均一穩(wěn)定。利用本發(fā)明生產(chǎn)的豬瘟細(xì)胞活疫苗安全性好、免疫效 力高，對豬瘟強(qiáng)毒攻擊具有較好的免疫保護(hù)作用。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng) 理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實(shí)施例 中未提及的具體實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。

利用生物反應(yīng)器大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，生產(chǎn)豬瘟細(xì)胞活疫苗的生產(chǎn)工藝技術(shù) 與方法，包括如下步驟：

(1)選擇生物反應(yīng)器：TideCell固定床微載體生物反應(yīng)器。

(2)選擇細(xì)胞系作為制苗用細(xì)胞：本實(shí)施例中選擇豬睪丸(ST)細(xì)胞系作 為制苗用細(xì)胞。在另兩個實(shí)施例中，分別選用豬腎(PK15)細(xì)胞系和豬腎(IBRS-2) 細(xì)胞系。