[發(fā)明專利]豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的制備方法及其制品

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910193067.0
• 申請日: 2009-10-14
• 公開（公告）號: CN101690808A
• 公開（公告）日: 2010-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳文福;林旭野;張毓金;岑小清;游啟有;任向陽;張國麗;丘成文;楊傲冰;賴月輝
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東永順生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/187;A61K39/245;A61P31/14;A61P31/20;C12N7/00;C12R1/93
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，更具體是涉及一種用傳代細(xì)胞制備豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的方法及其制品。

背景技術(shù)

豬瘟(CSF)和偽狂犬病(PR)是危害集約化養(yǎng)豬業(yè)的兩大重要傳染病，在我國豬群中廣泛存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。免疫接種是豬瘟和偽狂犬病防制的重要措施。但豬用疫苗品種很多，在實際操作中，多針次、多劑量、多種免疫程序難以合理安排，既繁瑣、費時、費力、增加成本，且容易造成漏種，直接影響免疫效果。采用多聯(lián)(或多價)疫苗免疫接種，以達(dá)到預(yù)防多種傳染病的目的。同時，這兩種疫病采取的免疫程序比較接近，這為豬瘟與偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的研制提供了可能。

發(fā)明內(nèi)容

為了達(dá)到一次免疫可有效預(yù)防和控制CSF與PR兩種疫病的發(fā)生與流行，減輕免疫接種的工作量，減少免疫次數(shù)，避免因頻繁免疫所造成的免疫麻痹，相應(yīng)減少了對豬群的應(yīng)激，本發(fā)明提供一種用傳代細(xì)胞制備豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的制備方法及其制品。

一種用傳代細(xì)胞制備豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的方法，包括如下步驟：

(1)用傳代細(xì)胞培養(yǎng)豬瘟病毒弱毒株和偽狂犬病病毒弱毒株；

(2)收獲所述步驟(1)得到的細(xì)胞培養(yǎng)毒液；

(3)把所述步驟(2)得到的兩種細(xì)胞培養(yǎng)毒液按一定比例混合，并在混合液中加穩(wěn)定劑和抗生素，經(jīng)冷凍真空干燥得到傳代細(xì)胞豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗。

所述步驟(1)包括如下步驟：

(1a)制苗用細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)：所述傳代細(xì)胞經(jīng)EDTA-胰酶細(xì)胞分散液消化傳代，用細(xì)胞生長液繼續(xù)培養(yǎng)，形成傳代細(xì)胞單層；

(1b)細(xì)胞毒種的繁殖：將新鮮脾毒制成病毒懸液，接種至所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，繼續(xù)培養(yǎng)，每隔4～5日收獲換液一次，取二收、三收的細(xì)胞培養(yǎng)毒液作為豬瘟活疫苗生產(chǎn)用毒種；將所述偽狂犬病病毒弱毒株接種至所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，用細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)，2～3日后收獲細(xì)胞培養(yǎng)毒液作為偽狂犬病活疫苗生產(chǎn)用毒種；

(1c)制苗毒液的繁殖：

豬瘟活疫苗制苗毒液的繁殖：取所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，棄去所述細(xì)胞生長液，接種所述步驟(1b)中得到的含豬瘟病毒的細(xì)胞維持液，繼續(xù)培養(yǎng)；

偽狂犬病活疫苗制苗毒液的繁殖：取所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，棄去所述細(xì)胞生長液，接種所述步驟(1b)中得到的含偽狂犬病病毒的細(xì)胞維持液，繼續(xù)培養(yǎng)；

所述步驟(2)收獲所述細(xì)胞培養(yǎng)毒液為：

將含豬瘟病毒的維持液接種到傳代細(xì)胞單層后培養(yǎng)，接毒后5日作第一次收獲換液，以后每隔4日收獲換液一次，收獲的毒液置于-15℃下保存；

將含偽狂犬病毒的維持液接種到傳代細(xì)胞單層后培養(yǎng)，接毒后2～3日收獲細(xì)胞培養(yǎng)毒液，收獲的毒液置于-15℃下保存；

優(yōu)選地，所述步驟(1a)、(1b)和(1c)中的細(xì)胞培養(yǎng)所用的溫度為36℃-37℃。

優(yōu)選地，所述步驟(1b)和(1c)中的接種時的接種量為1％～5％體積百分比的生產(chǎn)用細(xì)胞毒種的維持液。

優(yōu)選地，所述步驟(1a)中的細(xì)胞生長液為含90％～92％體積百分比的MEM液、8％～10％體積百分比的犢牛血清和抗菌素，所述細(xì)胞生長液的pH值為7.0～7.2。

優(yōu)選地，所述步驟(1b)和(1c)中的細(xì)胞維持液為含95％～98％體積百分比的MEM液、2％～5％體積百分比的犢牛血清和抗菌素，所述細(xì)胞維持液的pH值為7.2～7.4。

優(yōu)選地，所述傳代細(xì)胞選自豬睪丸傳代細(xì)胞ST、豬腎傳代細(xì)胞PK15和豬腎傳代細(xì)胞IBRS-2。

本發(fā)明還提供一種所述豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗，所述疫苗是通過上述的制備方法得到。

本發(fā)明的豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的制備方法，制備過程簡單且穩(wěn)定、易操作、病毒含量高、批間差異小、質(zhì)量易控、可顯著提高疫苗產(chǎn)量和質(zhì)量、減少過敏反應(yīng)等優(yōu)點。利用本發(fā)明的制備方法得到的豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗安全性好、免疫效力高，對豬瘟、偽狂犬病的強毒攻擊具有較好的免疫保護(hù)作用?，F(xiàn)有技術(shù)中免疫接種豬瘟和偽狂犬病活疫苗，采用分開免疫，多針次、多劑量，既繁瑣、費時、費力、增加成本，又難以合理安排免疫程序，而且豬瘟和偽狂犬病均為免疫抑制病，免疫劑量不合理會引起相互干憂，且容易造成漏種，直接影響預(yù)防效果。用本發(fā)明的豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗免疫接種，可減輕免疫接種的工作量，減少免疫次數(shù)，避免因頻繁免疫所造成的免疫麻痹，相應(yīng)減少了對豬群的應(yīng)激，達(dá)到“一針防兩病”。

下面將詳細(xì)介紹本發(fā)明的豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗的制備方法，以及制備出的豬瘟、偽狂犬病二聯(lián)活疫苗。