[發明專利]黃花蒿中青蒿素含量快速檢測技術

無效

• 申請號: 200910191258.3
• 申請日: 2009-10-29
• 公開（公告）號: CN102053121A
• 公開（公告）日: 2011-05-11
• 發明（設計）人: 冉輝;張梅;冉義坤;劉成林
• 申請（專利權）人: 重慶恒星生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08;G01N30/36
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及青蒿素快速檢測技術。具體講涉及通過索氏提取法快速從黃花蒿中提取青蒿素，并用高效液相色譜技術(HPLC)對青蒿素含量進行快速檢測的技術。涉及化學檢測技術領域。

背景技術

青蒿素是利用我國特有的植物資源黃花蒿研制成功的一種全新的抗瘧有效單體。由于其結構獨特，抗瘧機理特別，對抗氯喹的惡性瘧和腦性瘧有特效，且有高效低毒的特點，而被WHO稱為“世界上目前唯一有效的瘧疾治療藥物”。青蒿素是一種白色針狀晶體，分子式為C₁₅H₂₂O₅。1976年通過化學反應、光譜數據和X射線單晶衍射方法證明其為一種含有過氧基的新型倍半萜內酯。由于其具有特殊的過氧基團，它對熱不穩定，易受濕、熱和還原物質的影響而分解。

青蒿素是種具有過氧鍵和內酯環的倍半萜內酯，由于其不具有共扼結構，且化學性質不活潑，給定量測定帶來一定困難。但自從青蒿素發現以來，經過科研工作者的不懈努力，已經發展出了一系列基于青蒿素各項物理化學性質的分析測定方法。但檢測方法要與一定的分離提取方法相聯系，才能有效地應用在研究、生產工作中。由傳統的薄層色譜法、紫外分光光度法以及柱前衍生化-HPLC檢測法向直接HPLC法檢測過渡勢在必行。

青蒿素有多個手性碳原子，使得合成步驟非常復雜，產率低、成本高，很難應用于工業化生產。所以目前藥用青蒿素主要從黃花篙植株中提取。因此，準確定量測定青蒿素含量，對于黃花篙品種選育、青蒿素藥物生產以及藥理藥效研究都有重要的意義。不同栽培條件和地理環境青蒿素含量差別很大，青蒿素生產企業收購農戶青蒿時，需測定青蒿素含量，才能確定收購價格。青蒿干葉中提取青蒿素一般提取時間較長，需24h以上，檢測方法也不成熟。由于收購時間比較集中，農戶送來青蒿需等2-3周才能得到檢測結果，在生產上極為不便，限制了產業的發展，本發明研究的青蒿素含量快速檢測技術在青蒿素產業化開發中也具有重要價值和應用意義。

發明內容

本發明的目的是建立青蒿素高效液相色譜(HPLC)快速檢測技術。

本發明的內容包括以青蒿為原料，通過索氏提取法快速提取青蒿素，確定高效液相色譜技術的色譜條件，建立青蒿素快速檢測技術體系。

本發明建立青蒿素快速檢測技術體系，檢測時間短(1h)，結果可靠，是適于青蒿素生產企業檢測原料中青蒿素含量的成熟技術。

(1)從青蒿中提取青蒿素的索氏提取條件為：70％乙醇于65℃-85℃水浴，索氏提取提取時間為1-2h；6-8h；12-14h；18-20h；24-26h。

(2)HPLC檢測色譜條件為：色譜柱：Agilent?Eclipse?XDB?C8柱(5μm，4.6×150mm)；流動相為以下配方選基一：乙睛∶醋酸緩沖液＝20∶80；乙睛∶醋酸緩沖液＝25∶75；乙睛∶醋酸緩沖液＝30∶70；溫度：25-35℃；流速：1-2mL/min；波長：220nm。

本發明解決技術問題的方案分以下四個步驟完成：

(1)青蒿中青蒿素索氏提取：稱取100g青蒿鮮樣，研碎，將樣品裝入濾紙套筒中，把套筒小心地插入索氏提取器中，取300mL70％乙醇加入600mL平底燒瓶中，加入幾粒沸石。水浴加熱65℃-85℃，連續提取1-24h，分別在0.5-1h，1-2h，3-4h，6-8h，12-14h，18-20h，22-24h收集提取液，并以鹽酸中和。

(2)樣品提純：提取液加熱至70℃后經2％(w/v)活性炭脫色，攪拌30min，靜置后以3000r/min離心10min后收集上清液，再用1/5體積的10％三氯乙酸除蛋白，以3000r/min離心去除變性蛋白，上清液真空蒸發濃縮。濃縮后的殘渣以200mL70％乙醇沉淀，3000r/min離心后取上清液真空濃縮至30mL。

(3)HPLC檢測：樣品處理方法：1％醋酸水溶液99mL，加入1ml濃縮液，攪拌混勻后，取不同提取時間的提取液20μL做HPLC分析。標準曲線為：以峰面積(Y)與對照標準品濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程為y＝2395.3x-1.3591，R＝0.987，根據回歸方程計算出青蒿素濃度。

(4)取不同來源的青蒿干葉樣品6份，重復5次，用(1)，(2)步驟方法提取后，用(3)步驟計算出提取1-2h；6-8h；12-14h；18-20h；24-26h后青蒿素含量。

具體實施方式：

在下面的實施例中進一步說明了本發明，這并不限制本發明的范圍。

實施例1