[發明專利]轉基因細胞K562-Wnt5a及其制備方法

無效

• 申請號: 200910191167.X
• 申請日: 2009-10-20
• 公開（公告）號: CN101724603A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 司維柯;牛長春;李軍;李招權;潘靜;趙宸
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發明涉及一種轉基因細胞的構建，尤其涉及一種轉基因細胞K562-Wnt5a及其制備方法。

背景技術

Wnt5a蛋白是一種分泌型的糖蛋白，屬于Wnt家族，它不但與胚胎發育有關，它的異常表達與腫瘤發生有關，但在不同腫瘤中，Wnt5a發揮著不同的作用，如在它能促使乳腺癌、黑色素瘤、胰腺癌等腫瘤生長甚至可促使腫瘤的侵襲，而在甲狀腺腫瘤、結腸直腸癌等腫瘤中Wnt5a可能發揮著抑制腫瘤的作用。Wnt5a在腫瘤發生中的作用和機理仍不清楚。目前有研究發現：Wnt5a主要激活非經典Wnt信號通路發揮作用，在發育的組織、骨髓基質細胞和造血細胞中有表達，可促進造血干/祖細胞分化發育。

發明內容

本發明的目的在于提供一種轉基因細胞K562-Wnt5a，所述轉基因細胞K562-Wnt5a有利于進一步的研究表達過表達Wnt5a對于白血病的作用以及機制。

本發明的技術方案是：

轉基因細胞K562-Wnt5a，其保藏號為CCTCC-200958。

所述轉基因細胞包含基因片段Wnt5a。

所述基因片段Wnt5a來自以pSEB-Wnt5a為載體的逆轉錄病毒。

制備轉基因細胞K562-Wnt5a的方法，有下列步驟：

1)pSEB-Wnt5a、pCL-Ampho與脂質體2000共轉染HEK293細胞；

2)感染K562細胞并篩選陽性細胞克隆；

3)鑒定細胞陽性克隆，獲得轉基因細胞K562-Wnt5a。

所述鑒定陽性克隆的方法為Western?blot鑒定Wnt5a蛋白的表達。

本發明使用逆轉錄病毒作為載體，可以把外源性的啟動子和Wnt5a基因整合到細胞的基因組中，從而能夠穩定內源性表達Wnt5a而不丟失，便于對Wnt5a的研究。轉基因細胞K562-Wnt5a的構建，對于進一步研發白血病診斷和預后判斷指標和Wnt5a作為基因治療靶點的研究有重要意義，有利于進一步的研究表達過表達Wnt5a對于白血病的作用以及機制。

為讓本發明的上述和其它目的、特征和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，并配合附圖，作詳細說明如下。

附圖說明

圖1為pSEB-flag質粒圖譜；

圖2為質粒pAdTrack-TO4圖譜；

圖3為轉基因細胞K562-Wnt5a細胞Western?blot鑒定結果，其中1.K562-Wnt5a細胞；2.K562-vector細胞。

圖4為臺盼藍活細胞染色計數檢測細胞增殖的結果，其中藍色曲線為K562-vector細胞，紅色曲線為K562-Wnt5a細胞。

圖5為瑞氏染色觀察K562-Wnt5a細胞的形態，A為K562-Wnt5a細胞；B為K562-vector?cells(×1000)細胞。

圖6為電子顯微鏡觀察K562-Wnt5a細胞形態，A為K562-Wnt5a細胞；B為K562-vector?cells(×18000)細胞。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明，應理解的是，這些實施例僅用于說明本發明而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明轉基因細胞K562-Wnt5a細胞及制備方法的簡單改進，都屬于本發明要求保護的范圍。

本發明以質粒pSEB-Wnt5a為載體包裝逆轉錄病毒，構建轉基因細胞K562-Wnt5a細胞。

本發明利用Western?blot的方法檢測K562-Wnt5a細胞中Wnt5a蛋白表達水平的變化，證實轉基因細胞K562-Wnt5a細胞中Wnt5a蛋白表達量增高。

本轉基因細胞已保藏在中國典型培養物保藏中心，地址：湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學，保藏日期為2009年9月25日，保藏號為CCTCCNO：C200958，轉基因細胞名稱K562-Wnt5a。

材料和來源