[發明專利]一種利用甘薯實生種籽培育無病無毒試管苗的方法

無效

• 申請號: 200910183791.5
• 申請日: 2009-08-11
• 公開（公告）號: CN101627728A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 李強;王欣;李洪民;謝逸萍;李秀英
• 申請（專利權）人: 江蘇徐州甘薯研究中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所
• 代理人: 周愛芳

1、一種利用甘薯實生種籽培育無病無毒試管苗的方法，其特征是，利用甘薯實生種籽不帶病菌不帶病毒的特點，通過有性雜交獲得實生種籽，結合組織培養，培育無病無毒試管苗，具體步驟如下：

(1)甘薯有性雜交親本的篩選：

篩選甘薯高淀粉育種常用親本，利用ISSR、AFLP等分子標記手段，結合田間農藝性狀，分析常用親本的遺傳差異，篩選遺傳差異大的材料做親本；

(2)甘薯親本花蕾的誘導：

利用蔦蘿、蕹菜等甘薯近緣野生種做砧木，嫁接親本材料的薯苗，每天光照7-9小時，暗處理15-17小時，處理25-35天，誘導甘薯現蕾開花；

(3)有性雜交實生種子的獲得：

前一天下午把即將開花的花蕾用紙袋套上，第二天上午分別取不同親本的花粉，隔離定向授粉，并封閉花冠，經過30-40天，種子成熟，收獲蒴果，去除萼片和果皮，獲得有性雜交實生種子；

(4)無病無毒試管苗培育：

將實生種子沿種子底部刻去1-1.5mm見方的種皮，用蒸餾水沖洗干凈，超凈工作臺內用70％酒精浸泡30s，0.1％HgCl2消毒3min，無菌水清洗3-4次，接種在PH5.8培養基上進行培養；所述的培養基的組分和用量是：MS基本培養基1L，蔗糖30g，瓊脂7g；培養條件為光照2000-3000lux，14hr/d，溫度29±1℃，試管18mm×150mm，每管裝入培養基約10ml，鋁箔封口；培養15-20天獲得試管苗；將獲得的試管苗接種到培養基上進行培養，所述的培養基為：每1L?MS基本培養基添加0.3-0.5mg萘乙酸(NAA)、40g蔗糖和8g瓊脂，其PH5.8；培養條件同前，每隔4-5周，將試管苗剪取單莖節段繼代培養，獲得相同來源的無病無毒試管苗。