[發(fā)明專利]防除連作煙草青枯病的拮抗菌及用其微生物有機(jī)肥料

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910183359.6
• 申請(qǐng)日: 2009-09-18
• 公開（公告）號(hào): CN101659932A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈其榮;劉艷霞;楊興明;徐陽春;沈標(biāo)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01P1/00;C05G3/00;C05F11/08;C05F17/00;C12R1/01;C12R1/085
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1.用于防除連作煙草青枯病的拮抗菌，該菌株NJL-25屬于短短芽孢桿菌(Brevibacillus?brevis)，2009年7月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC?NO.3175，主要生物學(xué)特性為：革蘭氏染色陽性G⁺，細(xì)胞形狀為桿狀，在膨大孢囊內(nèi)含橢圓形芽孢，菌落平滑，嚴(yán)格好氧生長(zhǎng)，接觸酶陰性、V.P.反應(yīng)陰性，甲基紅試驗(yàn)陰性，發(fā)酵蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硝酸還原酶陰性，淀粉水解陰性，明膠水解陽性，分解酪蛋白陽性，不產(chǎn)生硫化氫，產(chǎn)生吲哚，最適生長(zhǎng)溫度30℃，最適pH為7.0。

2.用權(quán)利要求1所述用于防除連作煙草青枯病的拮抗菌所生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，該肥料還含有拮抗菌NJL-14，菌株NJL-14屬于蠟狀芽孢桿菌(Bacillus?cereus)，2009年7月10日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC?NO.3174。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的防除連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：該肥料中含有1×10¹⁰個(gè)/g以上的拮抗菌NJL-25和NJL-14、全氮質(zhì)量比含量為4～5％，全氮中質(zhì)量比90％以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為6～10％、有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量為30～35％。

4.權(quán)利要求2或3所述防除連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，包括：

1)將權(quán)利要求1所述的菌株NJL-25和菌株NJL-14分別接種到PDA培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵生產(chǎn)的條件為：初始pH范圍為7.0-7.2，培養(yǎng)溫度30℃，溶氧：通氣量范圍為30～100％，170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵中后期形成芽孢，發(fā)酵的拮抗菌液含菌或芽孢量≥1×10¹⁰個(gè)/ml；

2)將NJL-25和NJL-14液體菌劑按50L/噸的量分別接種到腐熟的豬糞堆肥和菜粕微生物酶解混合物中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30-50℃，發(fā)酵過程中每天翻堆1次，發(fā)酵5-7天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到1×10⁸個(gè)/g以上，分別獲得拮抗菌NJL-25和NJL-14的固體菌劑；

3)按豬糞堆肥和菜粕的微生物分解混合物兩類分別將拮抗菌NJL-25固體菌劑和NJL-14固體菌劑以體積比1∶1混合，獲得豬糞堆肥的固體混合菌劑和菜粕微生物分解混合物的固體混合菌劑；

4)再將豬糞堆肥的固體混合菌劑按體積比50-70％與菜粕微生物酶解混合物的固體混合菌劑按體積比30-50％的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟過程中翻堆2次，最后在溫度不超過60℃的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30％以下，包裝出廠即為防除連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟(1)所用PDA培養(yǎng)液配制方法為：

用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，經(jīng)過濾后濾液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值調(diào)至7.2-7.4，121℃滅菌20min。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中步驟(2)所用腐熟后的豬糞堆肥發(fā)芽指數(shù)為98％以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量≥35％，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1.2-2％，含水量質(zhì)量比25-30％。

7.權(quán)利要求2所述微生物有機(jī)肥料在防除連作煙草青枯病方面的應(yīng)用。