[發(fā)明專利]幾丁聚醣作為傳輸工具的應(yīng)用和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910178991.1
• 申請日: 2009-10-09
• 公開（公告）號: CN101711877A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳彰哲;黃瀚寧;陳建龍;陳正憲
• 申請（專利權(quán)）人: 吳彰哲;黃瀚寧;陳建龍;陳正憲
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K48/00;A61K39/00;A61K39/12;A61K38/39;A61K38/18;A61K9/70;A61K9/06;A61K8/73;A61K8/65;A61P17/02;A61P31/14;A61Q19/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明關(guān)于一種幾丁聚醣的基本組成制成的幾丁聚醣奈米微粒作為經(jīng)由皮膚傳輸工具的應(yīng)用與方法。

背景技術(shù)

目前所知的脫氧核糖核酸(DNA)疫苗的傳遞通常通過肌肉注射和基因槍轟擊金微粒到皮膚(例如Chen?et?al.，J?Virol?73：10137-45(1999)的論文中便有提及相關(guān)技術(shù))，且DNA覆蓋在金微粒上并通過直接轟擊的方式進入至細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中，藉以達到促進其編碼蛋白質(zhì)表現(xiàn)的效果，也因此基因槍通常使用高壓氦氣以傳遞覆蓋有DNA的金微粒使其穿過表皮的角質(zhì)層(此技術(shù)揭露在Bellhouse?et?al.，US?5,899,880的專利說明書中)。不過，由于高壓基因槍的轟擊具有較高的成本，其因在在高壓基因槍的操作需要通過技術(shù)較為純熟的操作手法并配合上具有非降解性的金微粒方可達到較佳的實施效果，不過，根據(jù)目前的文獻(Lin?et?al.，Mol?Ther?13：S291(2006))顯示，基因槍所普遍使用的非降解性金微粒卻可能因產(chǎn)生體內(nèi)堆積等情況而導(dǎo)致不良的副作用。

是以，目前生物技術(shù)領(lǐng)域中，積極地研究無針劑疫苗直接以皮膚作為DNA疫苗免疫管道，以期可達到方便、簡單，并同時提高其安全性，而在目前常見的無針劑疫苗中較可行的方式為以貼布形式經(jīng)皮傳輸抗原作為疫苗，通過皮膚具有大量免疫部位且存在大量抗原呈現(xiàn)細(xì)胞的特征而得以達到較佳的效果，更詳細(xì)來說，經(jīng)皮免疫可引起廣大的免疫反應(yīng)是因為存在表皮層和真皮層中的朗格漢細(xì)胞和樹突細(xì)胞(如Romani?et?al.，J?Exp?Med?161(6)：1368-83(1985)；Berry?et?al.，Infect?Immun?72(2)：1019-28(2004)的研究論文中均有相關(guān)敘述)。另外，在許多的研究中，抗原經(jīng)由皮膚傳遞的原理是一些佐劑或它們的次單位被使用在貼布和其它引起巨大免疫反應(yīng)的傳遞基礎(chǔ)，其中一般常使用的佐劑有霍亂毒素、綠膿桿菌外毒素、黏膜黏液素A、大腸桿菌中忌熱性腸毒素以及它們突變的次單位(可參酌Kersten?et?al.，Infect?Immun；68(9)：5306-13(2000)的技術(shù)論文)，由于上述的佐劑可誘發(fā)局部專一性T細(xì)胞粘膜免疫反應(yīng)對抗毒素或共同所傳遞的抗原(可參酌Freytag?et?al.，Curr?Top?MicrobiolImmunol?236：215-36(1999)的技術(shù)論文)，但上述公知的經(jīng)皮傳遞技術(shù)均各有其困難點而較不可能應(yīng)用在未來臨床使用。也因此，為了克服上述傳統(tǒng)技術(shù)缺點，本發(fā)明以幾丁聚醣作為傳輸工具的方法減輕和消除上述的問題。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明的主要目的是提供以幾丁聚醣為基本組成的幾丁聚醣奈米粒子為傳輸工具，并形成幾丁聚醣-脫氧核醣核酸復(fù)合體及幾丁聚醣-蛋白質(zhì)復(fù)合體以裝載脫氧核糖核酸或蛋白質(zhì)。本發(fā)明為幾丁聚醣奈米粒子為經(jīng)皮傳輸?shù)墓ぞ撸?dāng)幾丁聚醣-脫氧核醣核酸復(fù)合體通過貼布及低壓基因槍由皮膚傳遞而引起免疫反應(yīng)。

本發(fā)明可采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。

本發(fā)明的一種制作幾丁聚醣作為傳輸工具的方法，其特征在于幾丁聚醣是奈米級粒子，且?guī)锥【埘笔羌兌戎辽偃ヒ阴６?1％以上的幾丁聚醣作為原料，所述方法包括下列步驟：以1％(w/v)在167mM醋酸溶解幾丁聚醣產(chǎn)生幾丁聚醣溶液；調(diào)整幾丁聚醣溶液的酸堿度介于pH?4.0-6.0；以及添加交聯(lián)劑到幾丁聚醣溶液混合降解生成幾丁聚醣奈米粒子。

前述的方法，其中幾丁聚醣溶液降解方法選擇其一，包括離子凝膠、乳劑聚合乳化擴散。

本發(fā)明的一種幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體，其特征在于，包括：至少一個含氨基的幾丁聚醣奈米粒子；至少一個交聯(lián)劑；以及至少一個脫氧核糖核酸，與幾丁聚醣奈米粒子交聯(lián)N/P比不大于1∶5。

前述的幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中脫氧核糖核酸與幾丁聚醣奈米粒子交聯(lián)N/P比不小于1∶0.25。

前述的幾丁聚醣脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中幾丁聚醣脫氧核糖核酸復(fù)合體交聯(lián)劑為硫胺焦磷酸(TPP)。

前述的幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體N/P比介于1∶2至1∶5。

前述的幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體的脫氧核糖核酸是脫氧核糖核酸質(zhì)體。

前述的幾丁聚醣脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體的脫氧核糖核酸是脫氧核糖核酸疫苗。

前述的幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體，其中幾丁聚醣-脫氧核糖核酸復(fù)合體的脫氧核糖核酸是日本腦炎脫氧核糖核酸疫苗。