[發明專利]通過還原氨基化制備的羥烷基淀粉和蛋白質的偶聯物

無效

• 申請號: 200910165389.4
• 申請日: 2005-03-11
• 公開（公告）號: CN101659704A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 諾貝特·燦德爾;沃爾弗拉姆·艾希納;哈拉爾德·康拉特;弗蘭克·哈克特;克勞斯·朗格爾;米歇萊·奧爾蘭多;羅納德·弗蘭克
• 申請（專利權）人: 弗雷澤紐斯卡比德國有限公司
• 主分類號: C07K17/10
• 分類號: C07K17/10;A61K47/48;A61K38/18;A61K38/19;A61K38/21;A61K38/36;A61K38/37;A61K38/48;A61K38/49;A61P7/06;A61P7/00;A61P7/04;A61P1/00
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所
• 代理人: 陳文平;尚繼棟

1.一種制備包含蛋白質和聚合物的偶聯物的方法，其中該聚合 物是羥烷基淀粉，所述方法包括：

(a)聚合物與至少雙官能化合物反應，所述化合物包含兩個官能團M 和Q，一個官能團M與聚合物反應，一個官能團Q是

(i)一個醛基或酮基或半縮醛基，以生成醛基或酮基或半縮醛基官 能化的聚合物衍生物；或

(ii)一個可以化學修飾成醛基或酮基或半縮醛基官能化的聚合物 衍生物的官能團；和

(b)通過還原氨基化作用把聚合物衍生物的至少一個醛基或酮基或 半縮醛基與蛋白質的至少一個氨基共價連接。

2.如權利要求1的方法，其中羥烷基淀粉是羥乙基淀粉。

3.如權利要求2的方法，其中羥乙基淀粉的分子量是2到200kD。

4.如權利要求2的方法，其中羥乙基淀粉的分子量是4到130kD。

5.如權利要求2的方法，其中羥乙基淀粉的分子量是4到70kD。

6.如權利要求1的方法，其中還原氨基化作用在水性介質中進行。

7.如權利要求1的方法，其中還原氨基化作用在NaCNBH₃存在下 進行。

8.如權利要求1的方法，其中還原氨基化作用在pH7.5的pH下進 行。

9.如權利要求1的方法，其中還原氨基化作用在0到25℃的溫度 下進行。

10.如權利要求1的方法，其中在(a)(i)中官能團M是羧基或反應性 羧基，官能團Q是醛基或酮基或半縮醛基。

11.如權利要求10的方法，其中包含M和Q的雙官能化合物選自 甲酰苯甲酸、4-甲酰苯甲酸五氟苯基酯、4-甲酰苯甲酸N-羥基琥珀酰亞 胺酯、和4-(4-甲酰-3，5-二甲氧基苯氧基)丁酸。

12.如權利要求1的方法，其中在(a)(ii)中官能團M是氨基，官能 團Q是氨基。

13.如權利要求12的方法，其中包含兩個氨基M和Q的化合物是 具有2到20個碳原子的任選取代的二氨基烷。

14.如權利要求13的方法，其中該二氨基烷選自1，2-二氨基乙烷、 1，3-二氨基丙烷、和1，4-二氨基丁烷。

15.如權利要求12的方法，另外還包括聚合物衍生物-其得自聚合 物與包含兩個氨基M和Q的至少雙官能化合物的反應-在氨基Q上與 另一種包含羧基或反應性羧基和醛基或酮基或半縮醛基的雙官能化合 物反應，得到具有醛基或酮基或半縮醛基的聚合物衍生物。

16.如權利要求15的方法，其中所述另一種雙官能化合物選自甲酰 苯甲酸、4-甲酰苯甲酸五氟苯基酯、4-甲酰苯甲酸N-羥基琥珀酰亞胺酯、 和4-(4-甲酰-3，5-二甲氧基苯氧基)丁酸。

17.如權利要求12的方法，其中包含兩個氨基M和Q的化合物中 的氨基Q是β-羥氨基。

18.如權利要求17的方法，其中氧化該β-羥氨基得到醛基。

19.如權利要求17的方法，其中包含兩個氨基M和Q且Q是β- 羥氨基的化合物是1，3-二氨基-2-羥丙烷。

20.如權利要求18的方法，其中使用高碘酸鹽進行該氧化反應。

21.如權利要求1的方法，其中蛋白質選自EPO、G-CSF、IFNα、 IFNβ、AT?III、IL-2、IL-3、肌紅蛋白、SOD和BSA，或選自A1AT、 因子VII、因子VIII、因子IX、tPA、和APC。

22.一種包含蛋白質和聚合物的偶聯物，用如權利要求1所限定的 方法得到。

23.如權利要求22的偶聯物，其中該聚合物衍生物主要通過偶氮甲 堿和/或氨基鍵偶聯在蛋白質N-末端的氨基上，用于該反應的蛋白質包 含N-末端氨基和至少另外一個氨基。