[發明專利]P53融合蛋白及應用

無效

• 申請號: 200910163874.8
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101987873A
• 公開（公告）日: 2011-03-23
• 發明（設計）人: 藺新力
• 申請（專利權）人: 普羅特奧姆技術公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00;C07K14/435
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101
• 代理人: 王勇

1.分離純化的，具有生物活性的，四聚體形式的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53融合蛋白是p53蛋白與一個或多個外源肽融合。

2.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53蛋白是人p53蛋白。

3.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53蛋白包含從下組序列中所選擇的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：7中的2-393殘基、SEQ?ID?NO：7中的3-393殘基、SEQ?ID?NO：7中的4-393殘基、SEQ?ID?NO：7中的5-393殘基或SEQ?IDNO：7中的6-393殘基。

4.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53蛋白與兩個或多個外源肽融合。

5.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的外源肽融合于p53蛋白的N-端或C-端。

6.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的外源肽靶向癌細胞從而使p53融合蛋白內化到所靶向的癌細胞中。

7.權利要求6所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的外源肽通過一個連接肽融合于p53蛋白。

8.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述外源肽包含從下組序列中所選擇的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQID?NO：5或SEQ?ID?NO：6。

9.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53融合蛋白包含從下組序列中所選擇的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9、SEQ?ID?NO：10、SEQ?IDNO：11、SEQ?ID?NO：12或SEQ?ID?NO：13。

10.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53融合蛋白包含從下組序列中所選擇的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9、SEQ?ID?NO：10、SEQ?IDNO：11、SEQ?ID?NO：12或SEQ?ID?NO：13，其中p53蛋白序列的N-端氨基酸蛋氨酸被刪除。

11.權利要求1所述的p53融合蛋白，其特征在于：所述的p53融合蛋白是從大腸桿菌的包涵體中復性和分離純化出來。

12.包含權利要求1所述的p53融合蛋白的組合物。

13.權利要求12所述的組合物，其特征在于：包括藥用賦形劑。

14.權利要求12所述的組合物，其特征在于：所述組合物中的p53融合蛋白至少70％是四聚體的形式。

15.從大腸桿菌的包涵體中復性和分離純化出的p53蛋白，其特征在于：所述的p53蛋白是四聚體的形式。

16.包含權利要求15所述的p53蛋白的組合物。

17.權利要求16所述的組合物，其特征在于：所述的組合物中的p53蛋白至少70％是四聚體的形式。

18.生產具有生物活性的，四聚體形式的p53蛋白或p53融合蛋白的方法，其特征在于包括：

a)用溶解緩沖液溶解變性的p53蛋白或p53融合蛋白，所述溶解緩沖液包含高濃度的離液劑和還原劑，其pH為8.5～12.0，由此產生溶解的p53蛋白或p53融合蛋白溶液；

b)將溶解的p53蛋白或p53融合蛋白溶液加至復性緩沖液中，快速稀釋，產生稀釋的溶解的p53蛋白或p53融合蛋白溶液，其中的復性緩沖液包含Tris、L-精氨酸、去污劑、雙價陽離子或離液劑的一種或任何組合；

c)將稀釋的溶解的p53蛋白或p53融合蛋白溶液的pH降低至7.5～8.5，其中所述pH的降低用至少20小時完成，由此產生了復性的，具有生物活性的，四聚體形式的p53蛋白或p53融合蛋白。

19.權利要求18所述的方法，其特征在于：所述的溶解緩沖液中，包含8M尿素，10mM?β-巰基乙醇、10mM二硫蘇糖醇和1mM的谷胱甘肽，并且其pH為10～12。