[發明專利]水產品中致病細菌檢測基因芯片試劑盒

無效

• 申請號: 200910163733.6
• 申請日: 2009-08-14
• 公開（公告）號: CN101613762A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 范建忠;黃寶福;聞偉剛;游玉容;宋超霞;史雨紅
• 申請（專利權）人: 寧波博奧生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/63;C12R1/42;C12R1/19;C12R1/445;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物芯片技術檢測水產品中致病細菌的裝置及方法。

背景技術

食源性疾病是當今世界上最廣泛的公共衛生問題之一，目前已知有200多種疾病可以通過食物傳播，已報道的食源性疾病致病因子有250多種，其中大部分為細菌、病毒和寄生蟲；由致病細菌引起的疾病每年導致成千上萬人的死亡和無法估量的經濟損失，因此，致病細菌的快速、準確檢測與鑒定是控制細菌性疾病發生及疾病診斷與治療的重要手段。

傳統的分離培養、形態觀察、生理生化、選擇培養基等檢測病原菌的方法存在靈敏度低、特異性差、工作量大、耗時長、通量低等顯著缺點。目前檢驗檢疫工作中用于檢測和鑒定食源性致病細菌的主要方法有PCR、Southern?Blot雜交、酶聯免疫吸附法(ELISA)等簡單的分子生物學和免疫學方法。但是免疫學技術(如ELISA)靈敏性高，但容易污染，經常出現假陽性；通常采用一種病原菌一種特異性引物的特定病原體檢查的引物特異性PCR技術，雖然可以達到對單一菌的快速、準確和方便的診斷目的，但在病原菌未明時，需要多種不同引物進行實驗，這對于病原菌的復雜性和PCR程序的多樣性來說顯然不名夠理想；而且PCR的電泳結果不能作為最終結論，還需要其他探針雜交實驗的輔助；以上這些用于食源性微生物檢測的技術和方法都存在諸多技術問題，而且在實際中由于病原微生物種類繁多，上述方法很難同時對多種病原微生物進行高效的檢測。

近年來，隨著生物芯片技術的日趨成熟，高效、快速、準確、靈敏的生物芯片被應用到越來越多的領域如基因序列分析、雜交、基因突變檢測及多態性分析、基因分型、疾病檢測、食品微生物檢測等；該技術可同時將大量不同的探針固定于同一支持物上，因而可以一次性對同一樣品進行大量序列檢測和核酸分析；運用生物芯片技術可以克服其它常用傳統技術存在的問題，滿足在實際檢測工作中的快速、高通量、自動化檢測的要求；鑒于生物芯片的這些優點，國內外已經先后開發了多種生物芯片用于基因突變及多態性分析、基因插入或缺失、臨床診斷、微生物鑒別等多信領域。

發明內容

本發明提供水產品中致病細菌檢測基因芯片試劑盒。

本發明的技術方案如下：水產品中致病細菌檢測基因芯片試劑盒檢測食源性致病細菌的方法，其包括以下步驟：

(1)本發明的檢測芯片試劑盒由核酸提取試劑、PCR擴增試劑、芯片(附圖)、分子雜交試劑組成。

(2)根據待測各種致病細菌的特異基因序列設計多對引物和多個改良探針；所述待測致病菌為霍亂弧菌、單核李斯特菌、副溶血弧菌、沙門氏菌、志賀氏菌、出血性大腸桿菌(O157:H7)、金黃色葡萄球菌、創傷弧菌、耶爾森氏菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌、擬態弧菌。

(3)上述核酸提取試劑可以提取細菌的基因組DNA，用于下一步PCR擴增實驗。

(4)上述PCR擴增試劑可以特異性擴增目標微生物的特征序列，用于分子雜交。

(5)上述芯片上的特異性探針通過希夫堿反應結合到醛基修飾的基片上；各種探針組成致病菌檢測陣列，其整體構成水產品中致病細菌檢測基因芯片。

(6)本發明的水產品中致病細菌檢測基因芯片與微陣列芯片掃描儀和水產品中致病細菌檢測系統配套使用。進行檢測時，將擴增后的樣品DNA置于芯片上，當目標DNA和探針結合時，通過檢測各檢測位點的熒光情況對目標微生物進行定性分析。

本發明與已有技術比較，具有如下優點和效果：

首先，本發明針對12種致病菌設計的微陣列芯片可以同時檢測12種食源性致病細菌，達到對水產品進行快速、準確檢測的目的。

其次，本發明可以同時檢測8個樣品，達到快速檢測多個樣品的目標。

再者，本發明結合PCR技術和生物芯片及分子雜交技術，可以高通量、高靈敏度的快速進行檢驗檢疫。

附圖說明

附圖為檢測芯片外觀；

上述附圖序號為：1、特異性探針，2、基片

具體實施方式

以下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述：

1、樣品DNA提取：將增菌培養的菌液搖勻，以DNA提取試劑結合吸附柱法提取樣品中的細菌DNA。

2、PCR擴增細菌DNA：冰上融化PCR反應試劑，按比例與樣品DNA混勻，置于PCR儀上擴增。