[發明專利]一種納他霉素的提取純化方法

有效

• 申請號: 200910163163.0
• 申請日: 2009-08-19
• 公開（公告）號: CN101693732A
• 公開（公告）日: 2010-04-14
• 發明（設計）人: 宋奇健
• 申請（專利權）人: 北京東方瑞德生物技術有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06;A23L3/3562
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本發明涉及一種納他霉素提取純化方法。屬于化工技術領域。

納他霉素是一種多烯大環內酯類抗真菌素，它能抑制有害真菌，霉菌的生長而不作用于人體有益菌群，可作為食品防腐劑使用。納他霉素在國內外均有生產，主要是采用微生物發酵法即在培養液中加入菌種、發酵代謝后得到含有納他霉素的發酵液，經一定的步驟及工藝條件后獲取目標產物納他霉素。提取方法也較多例如異丙醇萃取，雙水相萃取，超濾納濾提取等等，

英國專利GB846933報道了從發酵液中用混合性極溶劑如甲醇、丁醇和甘油，采用萃取法提取納他霉素。專利GB2106498報道了體積濃縮法和從過濾液中用丁醇回收納他霉素，從而獲得了一種抗真菌混合物原液，從中可分離納他霉素。世界專利wo92/10580報道了在低pH下用甲醇溶解納他霉素，然后除去固形物，提高pH以沉淀納他霉素。這些提取過程一般要求多級純化，操作費用比較昂貴，而且納他霉素對酸降解非常敏感，存在提取量低的缺點。美國專利5942611報道了一種有效的提取高質量納他霉素的方法，該方法過程主要包括四步：1)用錯流過濾發酵液，濃縮至發酵液濃度達到10-50％(W/V)，濃縮過程中，可以在50-70℃條件下加熱發酵液以提高蒸發量和過濾速率。2)調節發酵液的pH在10-11，添加足夠量的水溶性有機溶劑如乙醇、丙醇、異丙醇、甘油等溶解發酵液中的納他霉素。可通過加抗氧化劑如抗壞血酸、BHA、BHT等來進一步提高納他霉素的穩定性。3)通過錯流過濾除去沒有活性的發酵不溶物。4)調節過濾液的pH在5.5-7.5范圍內，使納他霉素沉淀。過濾得到析出的晶體，可用于進一步純化，干燥。這種方法，干燥產品純度可以達到94-99％(無結晶水計算)，納他霉素回收率可達40％以上。

但是以上方法都存在設備要求高，工藝復雜，產品純度低，提取效率差，提取成本高，溶媒難以回收等問題。

本發明針對現有技術存在的缺點，提出了一種納他霉素的提取純化工藝，它具有工藝簡便，收率高、純度高、成本低等優點。

本發明是一種納他霉素的提取純化的方法，是從發酵液中提取納他霉素，其特征在于所說的方法由下列步驟組成：

(1)調節發酵液的ph值，過濾，分別收集固體和過濾液備用；

(2)洗滌收集到的固體，過濾，分別收集固體和過濾液，固體中再加入一定量的有機溶劑，攪拌均勻，浸泡。

(3)調節上述溶液的PH值，過濾，收集上清液；

(4)將上清液通過離子交換樹脂柱進行吸附，吸附后的上清液收集備用；用有機溶劑洗離子交換樹脂柱，收集洗脫液，調節ph值，濃縮，收集固體；

(5)用純凈水洗滌收集到的固體，洗滌完的水收集備用，固體干燥后即得納他霉素。

以下對本發明進行祥細描述：

本發明適用于生物發酵法生產納他霉素。當發酵完成后，通過加酸或堿的方法調節發酵液的ph值至5.0-8.5，最佳值為PH6.5。用過濾的方法分別收集固體(菌體和結晶)和過濾后的液體過濾液，再用過濾液洗一遍固體，用量為發酵液體積的5％-80％。然后在固體中加入有機溶劑，有機溶劑的體積為固體體積的5至50倍。有機溶劑可以是甲醇、乙醇、甘油或甲醇含量不低于5％的甲醇乙醇混合物。加酸或堿調節PH值至5.0-8.5，充分攪拌，使其均勻。攪拌均勻后，用過濾方法進行固液體分離，獲得含有納他霉素的上清液；將上清液通入離子交換樹脂柱，其中的納他霉素被離子交換樹脂吸附，再用甲醇(含量為75-99％)將納他霉素洗脫下來。洗脫液經加酸或堿調節ph值至7.0-8.0，濃縮，收集固體，用固體3-20倍體積的純凈水洗滌，固體干燥后即得納他霉素。離子交換樹脂可以用大孔弱酸性陽離子交換樹脂，例如丙烯酸系D113，D152等等。調節Ph值用的酸或堿可以用鹽酸、醋酸、磷酸、富馬酸或氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉。本發明除最后的產品需用純凈水洗滌外，其它各步洗滌用液為純凈水或各步驟收集的廢液包括過濾后的過濾液、離子交換樹脂處理后的上清液、濃縮結晶后除去晶體的濃縮液或以上液體混合物。使本發明中使用的水和有機溶劑可以實現全部回收和再利用。

本發明具有如下優點：工藝簡便、收率高、純度高(干基含量≥95％)、成本低，溶媒易回收，利于環保。

實施例1

步驟1、取發酵后所獲得的發酵液1.5升(納他霉素含量為6.0g/L)，用5％的鹽酸調節PH值至6.5，加入15g硅藻土做助濾劑，用2L的布氏漏斗過濾，至菌餅表面無液體為止。

步驟2、用300ml上述的過濾液頂洗菌餅，抽干菌餅。