[發明專利]檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗體

有效

• 申請號: 200910161621.7
• 申請日: 2009-07-17
• 公開（公告）號: CN101955531A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 車小燕;袁國勇;蔡建飄;王壓娣
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學;香港大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

技術領域

本發明涉及生化領域，具體涉及檢測病毒的試劑。?

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合癥(Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，PRRS)是以母豬的繁殖障礙、仔豬及成豬的呼吸道癥狀為主要特征的一種病毒性傳染病，其高死亡率在世界范圍內給養豬業造成巨大的經濟損失。自1987年在美國某個豬場發現PRRS以來，該病先后席卷整個北美、歐洲及亞洲。1990-1991年間該病在歐洲暴發流行，5000多個豬場發現本病，100多萬頭豬死亡。我國自1995年從加拿大引進種豬后，年底于華北地區爆發PRRS，1996-1998年更是出現“流產風暴”，發病母豬流產率達10-50％，母豬的死亡率高達10％。由于沒有有效的防治手段，PRRS在我國愈演愈烈，并于2006年出現嚴重疫情，26省300多個縣，379.8萬頭豬發病，死亡99.2萬頭，給養豬業帶來沉重打擊。PRRS爆發的原因在于其病毒復制過程存在變異，一般的疫苗難于預防，早發現，早隔離成為預防爆發流行的主要手段。?

經研究表明引起PRRS的病原體為豬繁殖于呼吸綜合癥病毒(Porcine?Reproductive?andRespiratory?Syndrome?Virus，PRRSV)，屬于尼多病毒目(Nidovirales)動脈炎病毒科(Arteriviridae)動脈炎病毒屬(Arterivirus)。PRRSV的基因組為不分節段的單股正鏈RNA，直徑約40-80nm，大約為15kd，含9個開放讀碼框(ORFs)。病毒上的囊膜蛋白是病毒的結構和保護性抗原的組成部分，在致病和免疫過程中發揮著重要的作用。根據序列分析及血清學試驗結果，將PRRSV分為兩個亞型，即美洲型(代表株：VR-2332)和歐洲型(代表株：Lelystad?Virus，LV)。PRRSV存在較大的基因變異，造成二者抗原性的差異也較大，因此兩個亞型在血清學試驗中很少有交叉反應。引起我國PRRS大規模暴發流行的主要是美洲型，流行病學調查發現我國亦存在歐洲型PRRSV。隨著病毒基因組的變異，抗原決定簇的改變或轉換，PRRSV的侵襲力和致病性可能還會不斷增強，對養豬業將造成更大的威脅。?

對豬繁殖與呼吸綜合癥做出快速、準確診斷，及時有效掌握PRRSV的流行特點和監測其高致病毒株的出現，對流行趨勢做出預測，盡早隔離并做出相應的防范，將能夠最大限度地減低疾病所造成的危害。?

PRRS病毒的檢測方法主要有病毒分離鑒定、免疫過氧化酶技術及RT-PCR檢測等。病毒分離培養是最確切方法，但很多豬場不能開展，而且費時；RT-PCR檢測技術含量及成本較高，同時易出現假陽性結果；抗體檢測方法以美國IDEXX和法國LSI最為經典，由于目前各豬場均使用PRRS疫苗預防，上述兩種方法都很難區分是疫苗免疫產生的抗體還是豬感染PRRSV?所產生，易出現假陽性；另外有些豬可能感染PRRS病毒但尚未產生抗體或曾感染過而現在血清轉陰等，出現假陰性。?

PRRSV基因組ORFs7編碼的核衣殼蛋白(Nucleocapsid?Protein，NP)包含所有PRRSV毒株保守的共同抗原決定簇，又有具歐洲型和美洲型特異性的抗原決定簇。同時NP在病毒粒子中含量較高，約占病毒總蛋白的40％，具有極強的免疫原性。該蛋白是一種能夠早期檢測PRRSV感染的有效標志，及早確診PRRSV感染，以便于快速采取有效的治療和隔離措施，是防止PRRSV感染的擴散及降低死亡率的前提，也是減少經濟損失的有效措施，而目前在國際上尚未有核衣殼蛋白抗原的檢測方法。為此我們利用基因工程技術，表達該PRRSV核衣殼蛋白，并制備抗該蛋白的單克隆抗體，在此基礎上構建雙抗體夾心ELISA法檢測PRRSV中的N蛋白，此抗原檢測方法對于PRRS的早期診斷、預防PRRS的爆發流行、疫苗評測以及流行病學調查具有重要意義。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提高檢測PRRS病毒的靈敏度和特異性。?

本發明解決上述問題的技術方案是：?

一種檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢測抗體，該抗體由保藏號為CCTCC?NO.C200851的雜交瘤細胞株G2C51A2分泌得到，記為單抗G2C51A2。?

一種檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒的捕獲抗體，該抗體由保藏號為CCTCC?NO.C200850的雜交瘤細胞株V1C12A1分泌得到，記為單抗V1C12A1。?