[發明專利]抗口蹄疫病毒血清型共享單克隆抗體及其識別的抗原表位

無效

• 申請號: 200910161346.9
• 申請日: 2009-07-31
• 公開（公告）號: CN101643720A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 于力;于永忠;周國輝
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;C07K7/06;C07K7/08;G01N33/577;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/569;A61K39/135
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及單克隆抗體，尤其涉及兩株抗口蹄疫病毒(FMDV)的血清型共享性單克隆抗體以及其中一株單克隆抗體所識別的抗原表位，本發明上述單克隆抗體及其識別的抗原表位在口蹄疫診斷或防治中的應用，屬于口蹄疫的防制領域。

背景技術

口蹄疫病毒(Foot?and?mouth?disease?virus，FMDV)屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬的成員，其基因組為單股正鏈RNA，全長約8.5kb。口蹄疫是嚴重危害偶蹄動物的重要傳染病之一，該病可引起幼畜死亡、產奶量下降、肉食減少、肉品下降、動物的生產性能降低，導致巨大的經濟損失。此外，由于貿易的限制和禁止而引起的損失更大，全世界每年由此造成的直接經濟損失可達數百億美元。2005年以來在我國江蘇、山東、甘肅、北京、河北等地爆發了Asia1型FMD(Asia1/JS/CHA/05，GenBank登錄號：EF149009)，由于在我國江蘇省首先分離，被稱作Asia1型江蘇譜系。該譜系口蹄疫病毒在我國牛群中一經流行，傳播趨勢迅猛，造成的損失極為嚴重。本世紀初O型口蹄疫病毒泛亞譜系在中國(O/Tibet/CHA/99，GenBank登錄號：AJ539138)及周邊國家甚至歐洲(Mason?PW?et?al.J?Gen?Virol.2003，84(Pt?6)：1583-93)均有流行，給許多國家造成巨大損失。因此，積極開展Asial型和O型口蹄疫(FMD)的研究，對我國FMD的防控具有重要的意義。

口蹄疫病毒的抗原結構十分復雜，不同血清型、基因型和分離株的口蹄疫病毒其抗原表位和抗原位點都不盡相同，存在廣泛的抗原變異。利用單抗逃逸突變株序列分析和交叉中和試驗，已鑒定了一些不同血清型FMDV的抗原位點，相關的研究主要來自O、A、C和Asial型FMDV。中和性單抗在保護易感動物抵抗口蹄疫病毒感染過程中起主導作用，而某些相對保守的免疫顯性表位可誘導機體產生血清型共享型單抗，對于FMDV感染的診斷具有重要價值。近年來，對于相對保守的VP2蛋白N-末端區域的抗原性研究已有報道，Yang報道的針對FMDV?VP2?N-末端的單克隆抗體中，9B4、15F7和F1412SA表位均為胰蛋白酶敏感型，用胰蛋白酶處理表位肽后，表位對單抗的活性消失，表明其表位屬于構象型，并包含Lys²(K₂)-Lys³(K₃)或Arg¹³(R₁₃)殘基；可是Freiberg報道的單抗13A6和本發明中單克隆抗體4B2情況類似，識別肽段相同且都是非胰蛋白酶敏感型單抗，表明兩者表位區域相同或相似，因此將兩單抗重鏈可變區序列進行比對，結果證明二者有相近之處但并非相同的單抗；2007年Wang等對Asia1型毒株YNBS/58的VP1和VP2上主要的抗原區段進行了免疫原性分析，結果發現，D7(VP1的133-163aa)和B1(VP2的1-33aa)兩個區段，都能夠誘導豚鼠淋巴組織增生，但D7有中和活性而B1無中和活性。當用D7和B1共同免疫豚鼠時，能夠誘導出很高水平的中和抗體反應，說明B1(VP2N-末端)對D7(VP1?133-163aa)的免疫原性有促進作用。在VP2的1-33aa區域，存在免疫活性位點，盡管不屬于中和性位點，但是該區段內的位點對于主要中和活性位點的免疫反應具有增強和促進作用。對于表位的定位和定性，國外這些研究是用單克隆抗體壓力篩選或用合成肽掃描技術，只能確定表位相關的氨基酸或肽段，不能精確地確定表位的位置和性質。我國雖有Asia1型和O型FMDV單克隆抗體的文章發表，然而尚未見到共享表位單克隆抗體的報道；有關FMDV共享表位的精確定位和定性，國內外尚無研究報道。

發明內容

本發明目的之一是提供兩株能分別分泌抗FMDV血清型非依賴性的單克隆抗體4B2和3D9的雜交瘤細胞系；

本發明目的之二是提供由上述單克隆抗體4B2所識別的所有血清型FMDV共有表位氨基酸序列；

本發明目的之三是將上述單克隆抗體或共享性表位用于診斷或預防口蹄疫。

本發明的上述目的是通過以下技術方案來實現的：

一株能分泌抗FMDV非血清型依賴性單克隆抗體的雜交瘤細胞系4B2，其微生物保藏號是：CGMCC?No.3103；分類命名：單克隆抗體雜交瘤細胞；保藏時間是：2009年5月18日；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所。