[發(fā)明專利]酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910160785.8
• 申請日: 2009-07-10
• 公開（公告）號: CN101684462B
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉魯民;范志恒;陳亮珍;于瑞鳳;楊曉英;陳剛;黃炳亮;彭虹旎;劉安邦;李紅軍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東康地恩生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/26;C12R1/685
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域??本發(fā)明屬于果膠酶生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)??酸性果膠酶是一種可將植物及其果實(shí)中含有的果膠類物質(zhì)，降解為小分子的半乳糖醛酸的酶制劑。可廣泛應(yīng)用于以植物果實(shí)、蔬菜等為原料的食品工業(yè)、飲料工業(yè)、果酒等工業(yè)生產(chǎn)中，具有提高果汁過濾速度、增加出汁率和收率、提高產(chǎn)品澄清度、延長產(chǎn)品保質(zhì)期的作用。目前，市場上的酸性果膠酶制劑主要有液體制劑、粉劑和顆粒制劑三種劑型。其中，液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快，保質(zhì)期短，難于商品化；而且其活力低4萬個單位(u/g)。

發(fā)明內(nèi)容??本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質(zhì)期短的問題，提供一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法。

本發(fā)明酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，具體按下述工藝步驟進(jìn)行：

1)、斜面菌種的制備：以黑曲霉為菌種，用麩皮、瓊脂、蘋果渣按重量比20∶2∶1的比例制成斜面種子培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌30min，冷卻后劃線接種于30℃恒溫培養(yǎng)72h；

2)、搖瓶菌種的制備：按麩皮100g、硫酸銨2g、葡萄糖1g、水200ml的配料比稱好原料，攪拌均勻后裝入3L三角瓶中，121℃高壓滅菌30min，冷卻后接種斜面菌種，接種重量比為1％～5％，30℃恒溫培養(yǎng)48h；

3)、發(fā)酵制備熟曲：按麩皮100、蘋果渣20、葵盤粉20、硫酸銨2、葡萄糖1和水300的重量配比稱好原料，混合拌勻后，121℃滅菌1h，冷卻后接種搖瓶菌種，接種重量比為3％，控制發(fā)酵室溫度為28～32℃，濕度80～100％，發(fā)酵84～96h，即得熟曲；

4)、浸提：以0.02mol的磷酸氫二鈉溶液與0.01mol的檸檬酸溶液配制成pH為3.8的浸提液，熟曲與浸提液按1∶3的重量比混合拌勻，浸提30min；

5)、固液分離：浸提后經(jīng)壓榨得混汁，在混汁中加入重量比為1％的氧化鋁聚凝劑以除去大分子雜質(zhì)，再經(jīng)板框過濾得清汁；

6)、去渣澄清：清汁經(jīng)超濾膜微濾，以除去清汁中的雜菌；

7)、乙醇沉淀：將微濾后的清汁，在攪拌的狀態(tài)下按80％的重量比加入體積比為95％的乙醇，靜置沉淀10h；

8)、固液分離：將步驟7)的沉淀物壓濾，除去乙醇，制得固態(tài)果膠酶；

9)、復(fù)溶：將固態(tài)果膠酶加入溶劑中進(jìn)行復(fù)溶，即得酸性果膠酶液體酶制劑；所述溶劑由甘油、山梨醇、聚乙二醇和山梨酸鉀組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為：20％、12％、0.5％和0.1％。

所述溶劑由甘油、山梨醇和聚乙二醇組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為：25％、12％和0.5％，復(fù)溶時，用鹽酸在快速攪拌的狀態(tài)下調(diào)整pH至3.8。

本發(fā)明以蘋果渣為誘導(dǎo)物，以黑曲霉為菌種，經(jīng)過發(fā)酵、浸提、固液分離、去渣澄清、乙醇沉淀、固液分離、復(fù)溶工序制得液體酸性果膠酶酶制劑，解決了現(xiàn)有技術(shù)液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質(zhì)期短的問題。

具體實(shí)施方式本發(fā)明酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，具體按下述工藝步驟進(jìn)行：

實(shí)施例1

1)、斜面菌種的制備：以黑曲霉3.316為菌種，該菌種來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為：CGMCC，No3.316；用麩皮、瓊脂、蘋果渣按重量比20∶2∶1的比例制成斜面培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌30min，冷卻后劃線接種于30℃恒溫培養(yǎng)72h；

2)、搖瓶菌種的制備：按麩皮100g、硫酸銨2g、葡萄糖1g、水200ml的配料比稱好原料，攪拌均勻后裝入3L三角瓶中，121℃高壓滅菌30min，冷卻后接種斜面菌種，接種重量比為1％，30℃恒溫培養(yǎng)48h；

3)、發(fā)酵制備熟曲：按麩皮100、蘋果渣20、葵盤粉20、硫酸銨2、葡萄糖1和水300的重量配比稱好原料，混合拌勻后，121℃滅菌1h，冷卻后接種搖瓶菌種，接種重量比為3％，控制發(fā)酵室溫度為30℃，濕度90％，發(fā)酵90h，即得熟曲；

4)、浸提：以0.02mol的磷酸氫二鈉溶液與0.01mol的檸檬酸溶液配制成pH為3.8的浸提液，熟曲與浸提液按1∶3的重量比混合拌勻，浸提30min；

5)、固液分離：浸提后經(jīng)壓榨得混汁，在混汁中加入重量比為1％的氧化鋁聚凝劑混勻，再經(jīng)板框過濾得清汁；

6)、去渣澄清：清汁經(jīng)超濾膜微濾，以除去清汁中的雜菌；

7)、乙醇沉淀：將微濾后的清汁，在攪拌的狀態(tài)下按80％的重量比加入體積比為95％的乙醇，靜置沉淀10h；

8)、固液分離：將步驟7)的沉淀物壓濾，除去乙醇，制得固態(tài)果膠酶；