[發明專利]基于結構型導電高分子材料技術的霍亂診斷用多通道芯片

無效

• 申請號: 200910160440.2
• 申請日: 2009-07-12
• 公開（公告）號: CN101620227A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 李榕生;干寧;楊欣;李天華;王峰;王魯雁;巫遠招;孔祖萍;任元龍;姜晶晶;陳仙雄
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基于結構型導電高分子材料技術的霍亂診斷用多通道芯片，屬于測試領域。?

背景技術

霍亂是由霍亂弧菌引起的一種烈性傳染病，屬于國際檢疫傳染病，也是我國傳染病防治法規定的甲類傳染病病原之一。該病發病急、傳播快、涉及范圍廣，可引起局部和世界性的爆發流行為特征；是一種嚴重危害人類健康和生命的傳染病。霍亂弧菌是導致感染者嚴重腹瀉的病原菌，作為國際檢疫傳染病——霍亂的病原診斷，以檢出O1群霍亂弧菌或O139群霍亂弧菌為準。?

長期以來，對霍亂弧菌的診斷都是采用傳統的檢驗方法，即形態學、生理生化特征及血清學鑒定以及噬菌體分型等，最快的也要十幾個小時才能完成。時間長、樣本量大、準確率低，且一次只能獲得一種致病菌種類和數量。近年來，在傳統的檢測方法基礎上，單克隆抗體和分子生物學技術越來越多地應用到霍亂弧菌的研究中，相關測試方法的飛速發展為霍亂弧菌的檢測提供了新的強有力的手段。其中主要有：膠體金標記免疫層析技術、實時熒光PCR技術、基因傳感器技術、間接免疫熒光技術、酶聯免疫吸附技術和核酸序列分析技術等。然而，上述方法中，病原體的分離費時費力，不適用快速批量診斷。由于需要孵育、洗脫、顯色等多重步驟，一般需要數小時。核酸PCR檢測諸法中，實時熒光定量PCR敏感性高、特異性強，可以縮短檢測窗口期，但需要較昂貴的儀器設備，無法大面積推廣，且分離核酸和進行PCR反應也需要數小時，故無法快速檢測。免疫膠體金試紙條可以在數分鐘內獲得結果，實現快速檢測，但一般只能達到半定量測定標準，敏感性差，成本高，也難以同時檢測多種抗?原。近年來發展很快的時間分辨熒光免疫分析方法和化學發光方法雖然靈敏度高，但是仍需要繁瑣的前處理，且檢測價格昂貴。其中免疫分析技術是實現傳染病準確診斷的重要手段，通過測定病后2周血清抗菌“診斷蛋白”(抗原/抗體，簡稱DP)含量，可以獲取病原體的種類和數量。免疫分析本身有很強的選擇性，對傳染病的早期診斷，判斷療效及預后等方面均有重要的意義。然而重大傳染病菌的檢測非常復雜，傳統的免疫分析通常只針對單一指標進行檢測。由于一種診斷蛋白可出現在不同病菌，或不同診斷蛋白可在同一致病菌同時出現，因此，開展高效的多重免疫分析方法(SMIAs)，從生物相關性的角度真實地定量反映各種致病菌的種類和數量；在早期預防和聯檢多種傳染病、判斷傳染病菌發展程度、觀察和評價治療效果等方面都具有重要的醫學價值。?

O1、O139霍亂弧菌聯檢需要同時獲取TP0821、TP0319、TP0624以及霍亂弧菌O139菌體蛋白、甘露糖敏感血凝(rMSHA)等幾種診斷蛋白含量，綜合分析才能得到，其中，前四種蛋白含量的檢測更具診斷意義。?

所述診斷蛋白TP0821、TP0319、TP0624、霍亂弧菌O139菌體蛋白，以及，相應的TP0821抗體、TP0319抗體、TP0624抗體、O139菌體蛋白抗體，其技術含義在霍亂診療技術領域是公知的。?

微流控芯片技術是將采樣、預處理、加試劑、反應、分離、檢測等集成在一塊幾平方厘米的微芯片上進行的一門前沿技術，具有分析速度快、信息量大、試劑消耗少、污染小、儀器簡便以及檢測速度和靈敏度俱佳等優點。微流控技術代表著21世紀分析儀器的發展方向。目前基于微流控芯片的檢測技術主要有紫外吸收檢測、激光誘導熒光檢測、電導檢測、伏安檢測等。其中紫外吸收檢測和電導檢測比較通用，但是其靈敏度較低；激光誘導熒光檢測和伏安檢測靈敏度較高，但是測定對象不多，限制了它們的推廣。而傳感器中采用電化學檢測，體積小、自動化程度高，非常適合于現場分析。?

目前，在微流控芯片技術領域，利用霍亂多種特征抗體同時檢測、快速診斷霍亂的技術尚未見報道；另一方面，該領域現有技術中多采用昂貴的黃金來作為測試傳感器核心元件也就是工作電極的基本材料，這種昂貴金屬材質的使用，增加了相關芯片的制造成本，鑒于芯片所偵測的相關傳染病所具有的公知的危險性，相關疾病偵測用微流控芯片內的黃金回收工作存在不安全因素，相關不安全因素會增加黃金回收工作的難度、增加黃金回收操作的成本，進而可能因經濟上得失權衡方面的實際考慮，造成貴重資源黃金的流失，顯然，這一技術缺陷也有待消除。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，在微流控芯片技術這樣一個總的技術框架內，研發出一種廉價的能夠利用霍亂多種特征抗體進行同時檢測的應用于快速診斷烈性傳染病霍亂的專用微流控芯片。?