[發明專利]應用畢赤酵母的pGAP調控表達葡聚糖外切酶的方法

無效

• 申請號: 200910159233.5
• 申請日: 2009-07-30
• 公開（公告）號: CN101624601A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 張愛聯;易國輝;屈直;屠發志;張添元;羅進賢
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N9/42;C12R1/84
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司
• 代理人: 莫 臻

1、一種應用畢赤酵母的pGAP調控表達葡聚糖外切酶的方法，其特征在于，其具體步驟如下：

1)、首先從畢赤酵母中擴增pGAP啟動子；

2)、在葡聚糖外切酶基因序列的3’末端融合His6標簽，構建由pGAP調控葡聚糖外切酶基因的畢赤酵母表達載體，并將這一載體轉化畢赤酵母基因組；

3)、根據載體上所帶的抗性基因篩選重組子作為工程菌株；

4)、將工程菌株接種于含碳源的液體培養基中，于28～30℃在生物反應器中發酵工程菌1～2d分泌表達葡聚糖外切酶，在發酵過程中用氨水維持pH在4～6；所述液體培養基是由以下組分組成：85％磷酸25～28ml/L，CaSO₄·2H₂O?0.8～1.2g/L，K₂SO₄?17～19g/L，MgSO₄·7?H₂O?13～16g/L，KOH?3.5～4.5g/L，碳源15～45g/L，蛋白胨18～22g/L，Yeast?extract?8～12g/L，PTM4?3～5ml/L；所述PTM4是由以下組分組成：CuSO₄·5H₂O?1.5～2.5g/L，NaI·2H₂O0.1～0.2g/L，MnSO₄·H₂O?2.5～3.5g/L，Na₂MoO₄·2H₂O?0.1～0.3g/L，H₃BO₃?0.01～0.03g/L，CoCl₂·6?H₂O?1.0～2.0g/L，ZnCl₂?6.5～7.5g/L，Fe₂(SO₄)₃·7?H₂O?20～25g/L，生物素0.1～0.3g/L，硫酸1～2ml/L。

2、根據權利要求1所述的應用畢赤酵母的pGAP調控表達葡聚糖外切酶的方法，其特征在于：所述碳源是甘油、油酸、山梨醇、葡萄糖、乳酸或甘露醇。