[發明專利]水稻育性恢復基因特異性分子標記的篩選方法

無效

• 申請號: 200910155608.0
• 申請日: 2009-12-17
• 公開（公告）號: CN101717819A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: 黃得潤;莊杰云;元芳麗;樊葉楊
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州天欣專利事務所 33209
• 代理人: 陳紅

技術領域

本發明涉及一種利用水稻種質資源篩選特異性分子標記的方法，特別是利用水稻種質資源篩選水稻育性恢復基因特異性分子標記的方法。

背景技術

水稻細胞質雄性不育(CMS)及其育性恢復，是實現水稻三系配套的基礎。在諸多CMS中，野敗型是我國三系雜交稻中應用最早、應用面積最為廣泛的不育胞質類型，且與生產上應用較多的其他胞質類型(K型、矮敗型、D型、岡型和印尼水田谷型)具有相似的恢保關系。這類胞質的育性恢復主要受兩個主效基因控制，分別是位于第1染色體短臂的Rf3和第10染色體長臂的Rf4。

在育種實踐中，恢復基因的篩選通常是通過大量的后代測交加以確定，其缺點是周期長、工作量大，同時表型鑒定在一定程度上受環境條件的影響，選育效率低。近年來，以基因型鑒定為基礎的分子標記輔助選擇逐漸在育種實踐得到有效應用。在育性恢復基因定位的基礎上，可以篩選到與恢復基因緊密連鎖的分子標記，但往往遇到標記多態性的組合特異性問題，即在特定親本之間呈多態的標記，在育種群體的親本之間可能呈現單態，需要針對具體育種群體的親本重新篩選多態性標記，既增加了工作量，又提高了育種工作的難度。如果能夠應用數量較大的種質資源，篩選出與育性恢復基因相關的特異性標記，就可以為水稻育性恢復基因分子標記輔助選擇的開展提供極大的便利。

發明內容

本發明的目的是提供一種篩選育性恢復基因特異性分子標記的方法，從而獲得可用于輔助篩選秈型不育系和恢復系的分子標記，加速水稻育種進程、提高選擇效率、節約成本。

本發明是通過如下技術方案來實現的：以攜帶水稻CMS育性恢復基因Rf3和Rf4的43份秈型恢復系和不攜帶這兩個基因的23份秈型不育系為材料，挑選與Rf3和Rf4基因緊密連鎖的PCR(聚合酶鏈式反應)標記，應用相應引物進行PCR擴增，擴增產物在6％的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳檢測。根據66份種質資源分子檢測結果，如果一個標記在不育系和恢復系之間呈現特異性差別(不育系中檢測到的條帶不在恢復系中檢測到，且恢復系中檢測到的條帶也都不在不育系中檢測到)，或在不育系檢測到特異條帶(特定條帶只在部分不育系中檢測到，而不在任何恢復系中檢測到)，或在恢復系檢測到特異條帶(特定條帶只在部分恢復系中檢測到，而不在任何不育系中檢測到)，則將該標記判斷為鑒定其連鎖基因的特異性分子標記。

經應用Rf3基因的6個連鎖標記和Rf4基因的5個連鎖標記檢測66份水稻材料，將微衛星標記RM10338和RM10353確定為鑒定Rf3基因的特異性分子標記，將RM6100和RM1108確定為鑒定Rf4基因的特異性分子標記；其中，RM10338在不育系和恢復系之間呈現特異性差別，其他3個標記在恢復系檢測到特異條帶。

附圖說明

圖1A為23份野敗型雄性不育系和43份恢復系的DNA標記檢測結果即分子標記RM10338的檢測結果；

圖1B為23份野敗型雄性不育系和43份恢復系的DNA標記檢測結果即分子標記RM6100的檢測結果。

具體實施方案

如圖1A、圖1B所示，M：Marker；1：II-32B；2：D優62B；3：V20B；4：博B；5：川香29A；6：菲改B；7：豐源A；8：岡46B；9：金23B；10：龍特浦B；11：內香2A；12：內香85A；13：天豐A；14：協青早B；15：印32B；16：優IB；17：珍汕97B；18：中100A；19：中1A；20：中2B；21：中3B；22：中9B；23：中浙A；24：207；25：253；26：926；27：CDR22；28：R402；29：To974；30：ZDZ057；31：測64；32：多系1號；33：恩恢58；34：輻恢718；35：廣恢128；36：桂99；37：江恢151；38：瀘恢17；39：密陽46；40：綿恢501；41：綿恢725；42：明恢63；43：明恢70；44：明恢77；45：明恢86；46：蜀恢162；47：蜀恢527；48：鹽恢559；49：宜恢1577；50：鎮恢084；51：CH238；52：CH59；53：中恢218；54：中恢8006；55：中恢111；56：中恢1176；57：中恢333；58：中恢161；59：特青；60：IR24；61：中恢8012；62：中恢8015；63：中恢465；64：中恢7492；65：R600；66：恢66。

具體篩選方法：

1.育性恢復基因特異性分子標記的篩選