[發明專利]一種脫除靈芝粗多糖中蛋白質和色素的方法

有效

• 申請號: 200910154835.1
• 申請日: 2009-11-24
• 公開（公告）號: CN101724088A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 邵平;孫培龍;何晉浙;姜慧燕
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

技術領域

本發明屬于生物分離純化技術領域，具體涉及一種脫除靈芝粗多 糖中蛋白質和色素的方法。

背景技術

真菌多糖是由10個分子以上的單糖通過糖苷鍵鏈接而成的高分 子多聚物，是一類可以控制細胞分裂分化、調節細胞生長和衰老的活 性多糖。真菌多糖以其多方面的生物活性和安全無毒副作用而備受醫 藥和食品工業的。靈芝是藥用真菌的一種，自古被作為貴 中藥，是一種營養和保健價值極高的大型擔子菌。靈芝多糖是靈芝主 要活性成分之一，已知的靈芝多種藥理活性大多和靈芝多糖有關。靈 芝多糖具有免疫調節、抗腫瘤、抗衰老、清除自由基、活血化瘀、抗 凝血、降血糖及護肝等功效。

多糖作為一種生物活性制品，一般需要分離純化到一定純度后才 能更好地發揮作用。尤其是要將其開發成對純度要求較高的藥品時， 除去其中所含雜蛋白是一個必不可少的純化步驟。對于多糖針劑制品 而言，更是必須脫除多糖中的蛋白質，否則蛋白質容易成為熱敏源。 而多糖制品中色素的純在，會對分光光度法測多糖時有很大影響，同 時也嚴重影響成品的感官質量，需通過一定方法將其脫除。另外，對 多糖結構作進一步分析與鑒定時，也要求必須除去其中的蛋白質和色 素類雜質。因此，粗多糖中蛋白質和色素的脫除是多糖分離過程中的 關鍵步驟。

通過熱水浸提等方法所得靈芝粗多糖中往往混雜著色素、低聚 糖、蛋白質等雜質，需進一步分離純化，提高多糖純度，以達到相關 產品原料的標準。通常的方法是對其中的蛋白質和色素采取不同的方 法進行分別去除。例如采用Sevag試劑法、三氟三氯乙烷法、三氯乙 酸法(TCA法)、鞣酸法、酶-Sevag聯用法及大孔樹脂吸附法等方法脫 除粗多糖中的蛋白質，其中Sevag法是經典的脫蛋白方法，條件比較 溫和，但需反復數十次才能除去盡量多的蛋白質。而粗多糖中色素的 脫除通常采用活性炭脫色、H₂O₂脫色或樹脂脫色等方法。以上方法 多以有機溶劑等對粗多糖進行處理，有機試劑用量大、耗時較長、成 高，且多糖損失較為嚴重；另外，生產中分液后，多糖溶液中 仍殘留有毒性較大的有機溶劑，需蒸發去除。

徑向流色譜法(Radial?Flow?Chromatography，RFC)是近十年來發 展起來的一種新型的色譜分離分析技術。徑向流色譜柱由兩個多孔滲 透樹脂玻璃同心圓筒及介于兩者之間的色譜分離介質構成，主要包括 內、外樹脂玻璃圓筒、分離介質、樹脂玻璃頂板和底板、以及不銹鋼 中心流體分布器等組件，采用獨特的徑向流動設計，流動相攜帶樣品 沿徑向遷移，不同于傳統軸向色譜柱的流體在柱內從一端流向另一 端。從而克服了傳統色譜技術操作壓力高、流速低、在大規模處理時 不便放大等缺點，具有操作壓力低、流速高、線性放大容易及處理量 大等突出優勢。

在用色譜法分離純化生物樣品時，為增加制備量，一般需要對柱 結構和尺寸進行相應的調整：一是保持色譜柱的長度不變，增加色譜 柱的直徑；二是保持色譜柱的直徑不變，增加色譜柱長度，這兩種方 法在一定程度上都可以增加樣品制備量。然而在傳統軸向色譜柱中， 隨著色譜柱長度的增加，柱壓相應增加，樣品保留時間延長，對柱子 的要求也增加，同時也給實際分離操作帶來諸多不變。而對于徑向流 色譜來說，由于它特殊的徑向流動設計，使得其在只增加柱長，保持 色譜柱直徑不變的情況下，便可線性增大樣品處理量，即樣品處理規 模可在保持相似色譜條件下直接放大，各組分保留時間及分辨情況基 本相同。因為保持徑向色譜柱的直徑不變時，樣品通過色譜柱內填料 的途徑也未改變，因此分離過程基本保持一致；同時，由于色譜柱的 長度增加，色譜柱的柱容量也增加，從而處理量就線性增大。

目前國內外在多純化過程中，對粗多糖中的蛋白質和等通常先后采取不同的工藝方法進行分別去除，以提高多糖純度，但 是如此操作工藝復雜、耗時，對多糖類生物活性物質的純化及工廠化 生產十分不利。且傳統脫蛋白脫色方法多以有機溶劑等對粗多糖進行 處理，不僅有機溶劑消耗數量巨大，且處理過程中多糖損失嚴重、成 本高、操作周期長、污染環境，對操作人員傷害較大。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種可同時、快速脫除靈芝粗多糖中蛋 白質和色素的高效、安全、經濟的方法。

本發明采用的技術方案為：