[發明專利]一種鱉甲抗肝纖維化提取物的制備方法

有效

• 申請號: 200910154792.7
• 申請日: 2009-12-08
• 公開（公告）號: CN101708189A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: 高建蓉;劉焱文;邵志華;張赤志
• 申請（專利權）人: 浙江衢化醫院;湖北中醫學院;巨化集團公司
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61K9/19;A61P1/16
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

技術領域

本發明涉及的是一種鱉甲抗肝纖維化有效物質的的提取制備方法，具體是涉及一種鱉 甲中能顯著抑制肝星狀細胞(HSC)活化增殖及膠原合成、發揮防治肝纖維化作用的活性 部位的提取制備方法。

背景技術

肝纖維化是各種原因引起的一系列損傷-修復、導致細胞外基質(ECM)合成與降解失 衡、合成沉積遠遠超過降解吸收、以及構成成分比例明顯改變的結果，大量ECM沉積于肝 小葉內并逐漸形成纖維間隔，嚴重破壞了肝組織的正常結構和功能，可致肝竇毛細血管化， 血流障礙，門脈高壓。肝纖維化是各種慢性肝病的共同病理學基礎，也是誘發肝硬化和肝 癌的必經途徑。肝纖維化治療主要包括去除病因與抗纖維化治療。公認徹底驅除原發病因 后，肝纖維化仍可繼續進展，機理為活化的肝星狀細胞通過自分泌或旁分泌再次激活HSC， 是故有效的抗纖維化治療成為控制慢性肝病進展和預防肝硬化肝癌、改善預后不可或缺的 重要環節。基因治療研究取得較大進展，目前存在的主要問題有基因導入的靶向性、表達 效率、可調控性及安全性尚未完全解決，真正應用于臨床還待時日；目前部分用治肝纖維 化的化學藥和生物藥存在一些毒副反應；許多以鱉甲為君藥組方的復方制劑如復方鱉甲軟 肝片、鱉甲抗纖方、鱉甲煎丸等，抗肝纖維化療效較好，但存在藥效物質基礎不明確、質 量控制標準不完善、藥物療效不穩定、臨床服用劑量過大、價格較昂貴等弊端，難以滿足 廣大患者尤其是農村和貧困地區患者的需求，據統計我國約1.3億人患有肝病，占總人口 的10％，針對國情，亟待開發價廉、有效且毒副作用小的抗肝纖維化藥物。

鱉甲為常用傳統中藥，源于鱉科動物鱉(Trionyx?sinensis?Wiegmann)的背甲， 具有滋陰潛陽、軟堅散結、退熱除蒸等功效；主治陰虛發熱、勞熱骨蒸、虛風內動、癥瘕、 久瘧瘧母等病癥。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種鱉甲抗肝纖維化提取物的制 備方法，尤其是一種鱉甲抗肝纖維化有效物質的制備方法，并鑒定了鱉甲抗肝纖維化活性 部位為分子量小于6000的肽類物質，從而為詮釋鱉甲抗肝纖維化的藥效物質基礎提供了 科學依據，并為將鱉甲研究開發成高科技含量抗肝纖維化藥物奠定堅實基礎。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的；

一種抗肝纖維化的鱉甲提取物的提取方法，該方法包括：

(1)稱取常規研磨的鱉甲粉50~100重量份，加蒸餾水200~300重量份，超聲提取5~30 分鐘，抽濾，濾渣再加蒸餾水50~300重量份，超聲提取5~15分鐘，抽濾；合并兩次產生 的濾液，冷凍干燥后得凍干粉；

(2)用加蒸餾水50~300重量份溶解上述的凍干粉，將水溶液裝于半透膜() 內，置100~150重量份蒸餾水中透析1~10小時，溫度為2~10℃；同法再透析一次，合并 兩次膜外透析液，真空冷凍干燥，收集A型凍干粉0.2~10重量份。

本發明取上述膜內液體，將膜袋置50~100重量份蒸餾水中透析1~6小時，溫度為 2~10℃；同法透析三次，棄去膜外透析液，將膜內液體真空冷凍干燥，收集B型凍干粉0.5~10 重量份。

A型凍干粉為分子量小于6000的物質，即鱉甲粗多肽成品；B型凍干粉為分子量大于 6000的物質。

本發明項目的藥理實驗結果顯示，與對照組相比，分子量小于6000的鱉甲多肽類物 質及其分離組分，能明顯抑制肝星狀細胞增殖，顯著下調轉化生長因子β₁(TGF-β₁)刺 激的LX-1細胞I、III型膠原、α-肌動球蛋白(α-SMA)蛋白表達，呈現量效關系，在較 高實驗濃度時作用顯著強于公認有效的抗肝纖維化藥物/細胞因子γ-干憂素(IFN-γ)。表 明鱉甲活性物質抗肝纖維化作用可能是通過阻斷TGF-β₁在HSC內的Smad、MAPK信號轉導， 阻止HSC向肌成纖維細胞(MFB)轉化，使I、III型膠原等基因表達明顯下調，減少膠原 合成分泌與促進膠原降解，達到抗肝纖維化目的。