[發(fā)明專利]同時檢測對蝦WSSV和IHHNV的方法及所用檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910154312.7
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN101792818A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發(fā)明（設計）人: 徐海圣;何琳;王美珍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.一種同時檢測對蝦WSSV和IHHNV核酸多重等溫擴增檢測試劑盒，其特征是該試劑 盒包括：

(1)、研磨液管：內(nèi)裝研磨液；

(2)、核酸提取液A管：內(nèi)裝乙酸鈉溶液；

(3)、核酸提取液B管：內(nèi)裝無水乙醇；

(4)、核酸提取液C管：內(nèi)裝質(zhì)量濃度為70％的乙醇；

(5)、TE緩沖液管：內(nèi)裝TE緩沖液；

(6)、UNG酶管：內(nèi)裝尿嘧啶DNA糖基化酶；

(7)、multi-LAMP反應液管：內(nèi)裝multi-LAMP反應液；

所述multi-LAMP反應液由以下組份組成：multi-LAMP引物WSSV-FIP、WSSV-BIP、 IHHNV-FIP和IHHNV-BIP各1～4μM，multi-LAMP引物WSSV-F3、WSSV-B3、IHHNV-F3 和IHHNV-B3各0.1～0.4μM，dATP、dGTP和dCTP各0.5～2mM，dTTP、dUTP各0.25～1mM， Tris-HCl?10～40mM，KCl?10～20mM，(NH₄)₂SO₄?5～15mM，MgSO₄?1～4mM，Triton?X-100 0.05％～1.0％，Betaine0.8～1.2M；其余為雙蒸水；

所述multi-LAMP引物的核酸序列如下：

WSSV-FIP：

5′-CTGCAACCTCAAAAATAGCCTCTGTTTTGGCAGTTTCTTCCGTTCTTTTGT；

WSSV-BIP：

5′-GCGAGCAAGGCAATTTCAGCTTTTCAAATCCAAGAGGCACTCCAAAT；

WSSV-F3：

5′-CTCCTGCGATAAAGGGATGTC；

WSSV-B3：

5′-AGTTGGATGGATTGAGGCGT；

IHHNV-FIP：

5′-GTCCTTGGAGTACAAGAGTGTTTATTTTTAATCTTAGCTTGGATAATCATCGT；

IHHNV-BIP：

5′-GAAAATCTCTTACCATCGGTGCATTTTGAAGGTGTTTGAGTCTCCT；

IHHNV-F3：

5′-CGACATCCGTGTACCAGA；

IHHNV-B3：

5′-AGAGCGTAGGACTTTCCG；

(8)、BstDNA聚合酶管：內(nèi)裝Bst?DNA聚合酶；

(9)、顯色劑管：內(nèi)裝核酸染料SYBR?Green?I；

(10)、陽性對照核酸管：內(nèi)裝拷貝數(shù)比為1∶1的對蝦WSSV和IHHNV陽性DNA；

所述IHHNV?DNA的GenBank序列號為：EF633688，目標序列位置為：2195-2410；所述 WSSV?DNA的GenBank序列號為：AF369029，目標序列位置為：55303-55517；

(11)、陰性對照管：內(nèi)裝滅菌的雙蒸水。

2.根據(jù)權利要求書1所述的同時檢測對蝦WSSV和IHHNV核酸多重等溫擴增檢測試劑 盒，其特征在于所述研磨液是由以下體積份的組份組成：

1～2M的三羥甲基氨基甲烷溶液5～10份，0.25～1.0M的乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5～2.0 份，質(zhì)量濃度5～10％的十二烷基磺酸鈉溶液5～10份，巰基乙醇0.01～1.0份，8-羥基喹啉 0.01～0.02份，平衡酚5～10份和氯仿5～10份，以雙蒸水定容到100份。