[發(fā)明專利]一種吳茱萸的組織培養(yǎng)法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910154310.8
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN101790960A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發(fā)明（設計）人: 毛碧增;陳銀龍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發(fā)明涉及一種吳茱萸組織培養(yǎng)的方法。

背景技術

吳茱萸為蕓香科吳茱萸屬其中的一個種，果實入藥，性熱，味辛、苦，具有散寒止痛， 降逆止嘔，助陽止瀉等功效，用于治療頭痛、疝痛、腳氣、痛經(jīng)、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、 口瘡等，藥用價值很高；生于溫暖地帶山地、路旁或疏林下，其分布于廣東、廣西、貴州、 云南、四川、陜西、湖南、湖北、福建、浙江、江西等地。

吳茱萸花單性，雌雄異株，苗期雌雄株不易分辨且不同株系果實有效成分含量差異大， 造成生產(chǎn)上品種混雜嚴重，單位面積果實產(chǎn)量低；而傳統(tǒng)的種子或插條育苗方式，繁殖系 數(shù)低，分別僅為40-55％(而雄株率高達50％)和10％左右；嚴重影響到優(yōu)良品種的大規(guī) 模應用和藥材品質(zhì)的一致性和穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種吳茱萸的組織培養(yǎng)方法，采用該方法能獲得大量 的吳茱萸的種苗。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種吳茱萸組織培養(yǎng)的方法，依次包括以下步驟：

1)、取無病斑、生長健壯的吳茱萸嫩芽進行流水沖洗；

2)、將上述流水沖洗后的嫩芽經(jīng)常規(guī)消毒，然后切成0.5～1.0cm長的小段嫩芽I，將 上述小段嫩芽I接種到誘導不定芽培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件為：16小時光照，光照強 度30～40μmol?m^-2.s^-1，溫度為26～28℃；8小時暗培養(yǎng)，溫度為20～22℃；上述光照和暗 培養(yǎng)交替進行；

3)、待小段嫩芽I上長出的不定芽長至2.0～3.0cm高的小苗I時，割取小苗I；將此 小苗I切成0.5～1.2cm長的莖段I，將上述莖段I接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條 件為：16小時光照，光照強度30～40μmol?m^-2.s^-1，溫度為26～28℃；8小時暗培養(yǎng)，溫度 為20～22℃；上述光照和暗培養(yǎng)交替進行；

4)、待莖段I上長出的不定芽長至2.0～5.0cm高的小苗時II，割取小苗II；將此小苗 II切成0.8～1.2cm長的莖段II，將上述莖段II接種到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件為： 16小時光照，光照強度30～40μmol?m^-2.s^-1，溫度為26～28℃；8小時暗培養(yǎng)，溫度為20～ 22℃；上述光照和暗培養(yǎng)交替進行；

5)、待莖段II上長出的不定芽長至3.0～5.0cm高的小苗III時，割取小苗III；將此小苗 III接種到生根培養(yǎng)基中；

6)、待上述小苗III長出大于2cm的至少3條根時，得可出瓶種植的種苗。

作為本發(fā)明的吳茱萸的組織培養(yǎng)法的改進：步驟2)中的誘導不定芽培養(yǎng)基為：MS基 本培養(yǎng)基+BA?0.5～1.0mg/l+IBA?0.1～0.5mg/l+糖20～30g/l+瓊脂5～9g/l，pH為5.5～6.0。

誘導不定芽培養(yǎng)基的制作方法具體如下：以MS基本培養(yǎng)基作為基礎，分別加入6-芐基 腺嘌呤(BA)、乙哚丁酸(IBA)、糖和瓊脂，均勻混合，利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl 調(diào)節(jié)pH為5.5～6.0；每1L的MS基本培養(yǎng)基中加0.5～1.0mg?BA、0.1～0.5mg?IBA、20～30g糖 和5～9g瓊脂。

作為本發(fā)明的吳茱萸的組織培養(yǎng)法的進一步改進：步驟3)和步驟4)中的增殖培養(yǎng)基 均為：MS基本培養(yǎng)基+BA?0.3～1.0mg/l+IBA?0.1～0.3mg/l+糖20～30g/l+瓊脂5～9g/l，pH 為5.5～6.0。

增殖培養(yǎng)基的制作方法具體如下：以MS基本培養(yǎng)基作為基礎，分別加入6-芐基腺嘌呤 (BA)和乙哚丁酸(IBA)、糖和瓊脂，均勻混合，利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl調(diào)節(jié) pH為5.5～6.0；每1L的MS基本培養(yǎng)基加0.3～1.0mg?BA、0.1～0.3mg?IBA、20～30g糖和5～9g 瓊脂。

作為本發(fā)明的吳茱萸的組織培養(yǎng)法的進一步改進：步驟5)中的生根培養(yǎng)基為：1/2MS 基本培養(yǎng)基+NAA?0.2～0.5mg/l+糖30g/l+瓊脂5～9g/l，pH為5.5～6.0。