[發明專利]基因工程浮萍

無效

• 申請號: 200910145410.4
• 申請日: 1998-08-11
• 公開（公告）號: CN101613718A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: A·-M·斯托普;N·拉漢達里
• 申請（專利權）人: 北卡羅萊納州立大學
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C12N15/82;C12N5/10;C12P21/02;C12P21/08;C12N9/08;C12N9/24
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 孔 青;黃可峻

1.用目的核苷酸序列穩定轉化浮萍的方法，其中所述核苷酸序列包含至少一個表達盒，所述表達盒包含賦予對選擇劑抗性的基因，所述方法包括以下步驟：

(a)提供浮萍組織靶，所述浮萍組織的細胞包括細胞壁；和

(b)以足以穿透細胞壁并將所述核苷酸序列沉積在所述組織的細胞內的速度，將所述核苷酸序列發射至所述浮萍組織靶，藉此產生穩定轉化的組織，

其中所述核苷酸序列由微彈攜帶；并且其中通過將所述微彈發射至所述組織，而將所述核苷酸發射至所述組織。

2.按照權利要求1的方法，其中所述微彈包括金屬粒子。

3.按照權利要求1的方法，其中所述微彈包括直徑為約0.5微米至約3微米的金屬粒子。

4.按照權利要求1的方法，其中提供許多微彈，每個微彈均具有固定其上的所述核苷酸序列，并且每個微彈均被發射至植物組織靶上。

5.用目的核苷酸序列穩定轉化浮萍的方法，所述方法包括以下步驟

(a)用包含載體的農桿菌接種浮萍植物組織，所述載體包含所述核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含至少一個表達盒，而所述表達盒包含賦予對選擇劑抗性的基因；和

(b)將所述組織與農桿菌協同培養，以產生穩定轉化的組織。

6.按照權利要求5的方法，還包括在包含足以抑制農桿菌生長的抗生素的培養基中，培養所述穩定轉化組織的步驟。

7.按照權利要求1或5的方法，還包括在包含所述選擇劑的培養基中培養所述穩定轉化組織的步驟。

8.按照權利要求1或7的方法，還包括從所述轉化組織再生穩定轉化浮萍植株的步驟。

9.按照權利要求1或5的方法，其中所述組織是愈傷組織、分生組織或葉組織。

10.按照權利要求1或5的方法，其中所述浮萍組織選自Spirodela、Wolffia、Wolfiella和浮萍屬。

11.按照權利要求1或5的方法，其中所述浮萍組織選自青萍、Lemna?miniscula和Lemna?gibba。

12.按照權利要求5的方法，其中所述農桿菌是根癌農桿菌或毛根農桿菌。

13.按照權利要求5的方法，其中所述載體是超級雙載體或C58衍生載體。

14.按照權利要求1或5的方法，其中所述核苷酸序列包含兩個目的基因。

15.按照權利要求1或5的方法，其中所述核苷酸序列編碼選自以下的蛋白或肽：胰島素、生長激素、α-干擾素、β-葡萄糖腦苷脂酶、成視網膜細胞瘤蛋白、p53蛋白、制管張素、leptin和血清白蛋白。

16.按照權利要求1或5的方法，其中所述核苷酸序列編碼選自以下的多體蛋白的至少一個蛋白或肽亞基：血紅蛋白、膠原蛋白、P450氧化酶和單克隆抗體。

17.用目的核苷酸序列穩定轉化浮萍細胞的方法，其中所述核苷酸序列包括至少一個表達盒，所述表達盒包含賦予對選擇劑抗性的基因，所述方法包括通過電穿孔將所述核苷酸序列引入浮萍細胞的步驟。

18.按照權利要求1-17中任一項的方法產生的穩定轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞。

19.穩定轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞，其包含摻入其基因組中的異源目的核酸。

20.按照權利要求19的轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞，其中所述目的核酸的側翼為摻入其基因組中的T-DNA邊界序列。

21.按照權利要求20的穩定轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞，其中所述浮萍組織、組織培養物或細胞包含少于5個拷貝的所述異源目的核酸。

22.按照權利要求19或20的穩定轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞，其中所述浮萍組織、組織培養物或細胞選自Spirodela、Wolffia、Wolfiella和浮萍屬。

23.按照權利要求20的穩定轉化的浮萍組織、組織培養物或細胞，其中所述浮萍組織、組織培養物或細胞選自青萍、Lemna?miniscula和Lemna?gibba。