[發明專利]采用Klebsiella sp. DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法

無效

• 申請號: 200910144403.2
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101613156A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 錢家忠;劉詠;陳舟;馬雷;嚴小三;陳天虎
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: C02F3/34
• 分類號: C02F3/34;C02F1/58;C12N1/20;C12R1/22;C02F101/16
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司
• 代理人: 何梅生

1、一種采用Klebsiella?sp.DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法，其特征是以可溶解含碳有機物作碳源，使用純化Klebsiella?sp.DB-2菌作為生物修復菌株，修復方法包括原位修復和異位修復。

2、根據權利要求1所述的采用Klebsiella?sp.DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法，其特征是所述可溶解含碳有機物為乙醇或乙酸鹽。

3、根據權利要求1所述的采用Klebsiella?sp.DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法，其特征是所述原位修復方法是在硝酸鹽污染地區鉆井或鉆孔，向井內或孔內灌注或加壓灌注純菌和含碳有機物的混合液，首次添加時維持水中菌濃度為10⁶-10⁹個/L、可溶解含碳有機物與硝酸鹽氮的摩爾比C/N為1～5∶1，對于硝酸鹽氮含量超過100mg/L的地下水，第15天再添加一次以保持細菌的數量與活性。

4、根據權利要求1所述的采用Klebsiella?sp.DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法，其特征是所述異位修復方法是將硝酸鹽污染地區的井水抽出，混合Klebsiella?sp.DB-2菌種和可溶解的含碳有機物后，重新灌注到地下；首次添加時維持水中菌濃度為10⁶-10⁹個/L、可溶解的含碳有機物與硝酸鹽氮的摩爾比C/N為1～5∶1，對于硝酸鹽氮含量超過100mg/L的地下水，第15天再投加一次以保持細菌的數量與活性。

5、根據權利要求1所述的采用Klebsiella?sp.DB-2菌修復地下水中硝酸鹽污染的方法，其特征是所述純化Klebsiella?sp.DB-2菌種的制備按如下過程進行：

a、菌種的選擇：取垃圾滲濾液，加入到反硝化細菌培養基中富集，在厭氧條件下得到富集菌液后，取菌液在反硝化細菌培養基上按照倍比稀釋的方法涂布，待長出菌落后，挑取菌落，在反硝化細菌培養基上劃線，經過多次劃線分離，得到純化的單菌落；將形態不同的單菌落分別接種到反硝化富集培養基中富集后，用格利斯試劑進行定性的菌種篩選，再將所得的菌株分別進行定量實驗，篩出一株異養兼性厭氧的高效反硝化細菌，其菌落為圓形、乳白色、表面光滑、中間突起、邊緣整齊、易挑取，革蘭氏陰性，鏡檢呈短桿狀、八字形排列細菌，經16SrDNA序列數據庫鑒定為克雷伯氏Klebsiella?sp.，獲得Klebsiella?sp.DB-2菌株；

b、Klebsiella?sp.DB-2菌種子液培養：采用反硝化細菌培養基，將所述反硝化細菌培養基的pH調節到7.2-8.4后滅菌，接種步驟a所得Klebsiella?sp.DB-2菌株，28℃～30℃厭氧培養48小時，用血球計數板計算菌數使其濃度達到10⁸～10¹¹個/L數量級。

6、根據權利要求書5所述的方法，其特征是所述接種的反硝化細菌Klebsiella?sp.DB-2的菌液接種量按體積比為1％～3％。