[發明專利]通過重組藻類表達FAEES及新型體內生產生物柴油的方法

無效

• 申請號: 200910142892.8
• 申請日: 2009-05-20
• 公開（公告）號: CN101892091A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 黃赤夫
• 申請（專利權）人: 湖北匯特生物醫藥技術有限公司
• 主分類號: C10L1/02
• 分類號: C10L1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用藻類油脂及其用于制備生物柴油的生物技術方法。其特征在于，包括利用藻類體內油脂與外界加入的乙醇發生酯交換反應制備生物柴油的方法，即通過基因工程技術將一個能表達脂肪酸乙脂合成酶(以下稱之為FAEES)活性的基因轉入進去，在藻類體內表達的FAEES就能在一定的條件下催化藻類體內的脂肪酸與外界加入的(外源)乙醇反應，得到生物柴油，副產物為甘油。

2.按權利要求一所述利用藻類油脂及其用于制備生物柴油的生物技術方法。其特征在于，所述利用藻類油脂及其用于制備生物柴油的步驟如下：

1)基因克隆：克隆脂肪酸乙脂合成酶基因，如人肝臟細胞脂肪酸乙酸乙脂合成酶FAEES基因。

2)質粒構建。將FAEES基因連接到質粒pUC19中，得到FAEES+pUC19。制備大腸桿菌感受態細胞，轉化大腸桿菌。

3)質粒擴增。在大腸桿菌中擴增質粒。提取質粒。

4)構建表達載體。用Xho?I和Xba?I酶切質粒pUC19，電泳，膠回收目的基因。再用Xho?I和Xba?I酶切質粒pKy71，得粘性末端。J將FAEES基因連接到質粒pKy71中，得到FAEES+表達載體。

5)轉化農桿菌。制備農桿菌感受態細胞，用上一步得到質粒轉化農桿菌。

6)轉染藻類：轉化后的農桿菌與藻類共培養，使FAEES基因插入藻類基因組中。

7)基因表達：洗去農桿菌后，大量培養轉基因藻類。

8)藻類生物大量培養在含乙醇的培養基中。

9)脂肪酸乙酯的檢測

檢測脂肪酸的含量變化。當含量不再變化時，破碎藻細胞經分離收集培養混合物，以催化工藝生產生物柴油，副產物為甘油。

3.按權利要求二所述生產的生物柴油。

4.權利要求包括脂肪酸乙脂合成酶和脂肪酸甲脂合成酶，在生物柴油(脂肪酸乙脂和脂肪酸甲脂)的體內和體外生物合成應用。

5.按權利要求所述的藻類包括小球藻，微藻，常見的藻類和其他不常見藻類，淡水和咸水藻類。