[發(fā)明專利]抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小干擾RNA分子及其編碼基因

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910142212.2
• 申請日: 2005-03-25
• 公開（公告）號: CN101597607A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發(fā)明（設計）人: 曹穎莉;劉力;張云;王樹惠
• 申請（專利權）人: 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/00;A61K48/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 魯 兵

本申請是2005年3月25日提交的申請?zhí)枮?00510057000.6專利申請的分案。

技術領域

本發(fā)明涉及抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小干擾RNA分子及其編碼基因。

背景技術

引起嚴重急性呼吸綜合癥(Severe?Acute?Respiratory?Syndrome，SARS)的病原體SARS-CoV為一種新型的冠狀病毒，具有棘突蛋白S(spike)，基質蛋白M(matrix)，包膜蛋白E(Envelope)和核蛋白N(Nuclear?protein)等數(shù)種主要結構蛋白(HolmesKV.SARS-associated?coronavirus.N?Engl?J?Med，2003，348(20)：1948-51.)。研究表明，S蛋白是該病毒的主要保護性抗原，N蛋白和M蛋白也可以誘導免疫效應，特別是N蛋白具有較強的免疫原性。SARS-CoV?N蛋白由422個氨基酸殘基組成，相對分子質量48KD，其編碼基因的長度為1268bp，是SARS-CoV主要的結構蛋白，在冠狀病毒顆粒中，N蛋白位于病毒顆粒的核心部分和基因組RNA結合(Marra?MA，JonesSJ，Astell?CR，et?al.The?genome?sequence?of?the?SARS-associatedcoronavirus.Science，2003，300(5624)：1399-1404.；Wang?J，Ji?J，Ye?J，et?al.The?structure?analysis?and?antigenicity?study?of?the?N?protein?of?SARS-CoV.Genomics?Proteomics?Bioinformatics，2003，1(2)：145-154.)。以往對動物冠狀病毒結構蛋白的研究表明，N蛋白在病毒復制和產生的病理反應中起重要作用(HiscoxJA，Wurm?T，Wilson?L，et?al.The?coronavirus?infectious?bronchitis?virusnucleoprotein?local?izes?to?the?nucleolus.J?Virol，2001，75(1)：506-512.)。但目前，尚未有直接而有效的抑制SARS-CoV的方法。

RNA干擾技術(RNAi)是在小雙鏈RNA(dsRNA)分子的介導下特異性降解靶基因的生物技術，能使基因表達沉默，達到拮抗靶基因和實現(xiàn)生物(基因)治療目的。長度為21到22個堿基的所謂小干擾RNA(siRNA，small?interfering?RNA)介導特異性干擾反應，只降解與其高度互補的特定基因的mRNA(Elbashir，S.M.，Harborth，J.，Lendeckel，W.et?al.，Duplexes?of?21-nucleotide?RNAs?mediate?RNAinterference?in?cultured?mammalian?cells，Nature，2001，411(6836)：494)。RNAi技術因其在疾病治療方面具有巨大潛力而備受關注。迄今為止，有關siRNA可誘導產生針對SARS病毒基因RNA的干擾效應，從而使該病毒的復制和蛋白表達受到抑制對細胞形成保護作用，在ncbi上已有一些報道，但針對SARS-CoV?N蛋白設計的siRNA未見報道。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供可抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小干擾RNA分子及其編碼基因。

本發(fā)明所提供的抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小干擾RNA分子，是下述1)和2)中的至少一個雙鏈RNA序列：

1)正義鏈具有序列表中序列1的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列2的核苷酸序列；

2)正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列。

將具有1)的雙鏈RNA序列命名為siRNA1，其反義鏈與SARS-CoV?N?mRNA(序列表中的序列9)的213-233位置序列5’GGGCGUUCCAAUCAACACCAA?3’互補。序列表中序列1由21個堿基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端；序列表中序列2由21個堿基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端。