[發明專利]一種抗剛地弓形蟲表面抗原1人源抗體Fab片段及其編碼基因

有效

• 申請號: 200910141029.0
• 申請日: 2009-05-11
• 公開（公告）號: CN101565465A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發明（設計）人: 付永鋒;程訓佳;橘裕司
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/20;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;A61K39/395;A61K47/48;A61P33/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬生物技術領域，涉及抗剛地弓形蟲抗原抗體，具體涉及一種抗剛地 弓形蟲表面抗原1(SAG1)人源抗體Fab片段及其編碼基因和用途。

背景技術

剛地弓形蟲(Toxoplasma?gondii)簡稱弓形蟲，屬于頂復門、真球蟲目、弓 形蟲科，是一種世界性分布的專性細胞內寄生的機會性致病原蟲，可引起人獸共 患的弓形蟲病(toxoplasmosis)。免疫缺損者(如惡性腫瘤、器官移植和應用免 疫抑制劑患者，以及免疫缺陷者)感染弓形蟲后，導致腦膜炎、肝炎、肺炎等嚴 重的全身性弓形蟲病，甚至死亡。由于弓形蟲病是艾滋病患者的最重要并發癥之 一，近些年來隨著艾滋病感染率的升高，弓形蟲病發病率也不斷增高。據調查， 30％-40％的艾滋病患者伴有弓形蟲病，弓形蟲腦炎已成為艾滋病患者死亡的重要 原因之一。研究顯示，初孕婦女感染弓形蟲后，可以經胎盤垂直傳播給胎兒，導 致流產，畸胎或死胎。受感染的新生兒往往患有先天性弓形蟲病而出現各種畸形 及智力發育不全等癥狀，嚴重影響優生優育。

目前臨床上治療弓形蟲病仍以傳統的磺胺嘧啶、乙胺嘧啶和葉酸的聯合用 藥為主，雖然具有一定的療效，但療程過長，往往由于其抑制骨髓、損害肝臟、 易出皮疹等嚴重副作用而被迫停止用藥。尤其是弓形蟲腦炎、先天性弓形蟲病以 及免疫缺陷病人不能耐受長期化療，而停藥后復發率高，根治效果差。

由于弓形蟲為專性細胞內寄生原蟲，因而阻斷其對宿主細胞的粘附和入侵， 從而可以控制其感染的發生和發展，這是被動免疫作用防治弓形蟲的有效機制之 一。SAG1作為弓形蟲速殖子表膜表面的主要抗原之一，是迄今研究最多的弓形 蟲表膜蛋白。研究顯示，SAG1主要分布于弓形蟲速殖子表膜、速殖子內以及納 蟲空泡的管狀結構中，僅占弓形蟲體總蛋白的3％～5％，卻可抑制患者血清中 50％的抗體活性，說明SAG1含量雖然少，卻是速殖子的主要抗原成分，是誘導 宿主免疫應答的主要靶抗原，其能夠誘導機體產生IgG、IgM、IgE、IgA及SIgA 多種抗體。抗SAG1抗體在體外具有抑制弓形蟲速殖子感染宿主細胞及殺蟲作 用，在體內也具有保護作用，并可誘導機體產生一些細胞因子，如γ-干擾素、白 細胞介素等。Mineo等用滅活的抗SAG1的鼠血清和抗SAG1單克隆抗體的Fab 片段進行抗體中和抑制試驗，結果顯示抗SAG1血清和單克隆抗體都可抑制87％ 的弓形蟲強毒株RH株入侵人體成纖維細胞，對弓形蟲弱毒株PTg也有60％作 用，而對于SAG1缺陷株僅有10-20％的抑制效果。同時研究發現兩株抗SAG1 抗體6A8和JS能夠抑制弓形蟲的生長，其抑制生長作用隨著抗體濃度的增加而 增強。在體外，抗SAG1?IgG還可以與人體血清中的C3補體相結合，從而激活 人體血清中的補體系統，溶解弓形蟲速殖子，導致蟲體死亡。因此，抗剛地弓形 蟲SAG1人源抗體Fab片段，即可成為弓形蟲病治療的抗體靶向藥物，也可以預 防弓形蟲感染的抗體藥物。

目前，研究實踐所得到的抗SAG1多克隆抗體和單克隆抗體多為鼠源抗體或 兔源抗體。鼠源抗體和兔源抗體由于具有免疫源性，在應用于人體可引起機體針 對異種蛋白的免疫反應，產生人抗鼠抗體或人抗兔抗體，既影響療效，又可誘發 過敏反應，因而難以應用于臨床。雖然可以通過抗體工程技術，對其進行人源化 改造，但技術過程繁雜，耗時耗力，短期難以取得成效；轉基因動物亦有價格昂 貴、產量受限等問題。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種抗剛地弓形蟲SAG1人源 抗體Fab片段及其編碼基因。

本發明所述的人源Fab抗體選自抗剛地弓形蟲人源免疫球蛋白基因文庫。

本發明提供了下述能編碼識別剛地弓形蟲SAG1人源Fab片段及其編碼基因， 然而產生本發明的基因序列的方法不受特別的限制。

(1)抗剛地弓形蟲SAG1人源抗體Fab片段的輕鏈(L鏈)可變區(V區) 和恒定區(C區)；

(2)抗剛地弓形蟲SAG1人源抗體Fab片段的重鏈(H鏈)可變區(V區) 和恒定區1(C區1)。

所述的L鏈含有如SEQ1列出的氨基酸序列。編碼所述的L鏈的氨基酸 序列的DNA如下：

SEQ?1：L鏈基因

??????D??I??V??M????T??Q??S??P??S??T???L??S??A??S???V??G??D???R??V??T