[發明專利]檢測蜱體內萊姆病病原的試劑盒及檢測方法

無效

• 申請號: 200910139905.6
• 申請日: 2009-07-09
• 公開（公告）號: CN101613757A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 殷宏;羅建勛;牛慶麗;關貴全;楊吉飛;高金亮;馬米玲;劉愛紅;劉志杰;李有全;劉軍龍;任巧云
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/01
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司
• 代理人: 張 晉

1、檢測蜱體內萊姆病病原的試劑盒，其特征在于試劑盒內至少有：其上共價結合有萊母病病原螺旋體通用探針和狹義螺旋體B.buredorferi?sensu?stricto、嘎氏螺旋體B.garinii，、伽氏螺旋體B.afzelii和B.valaisiana螺旋體特異寡核苷酸探針的Biodyne?C膜，以及在螺旋體5S-23SrRNA基因序列兩端的保守區域設計的一對可擴增出的片段大小為225bp的引物，且其中的一條引物用生物素標記。

2、根據權利要求1所述的檢測蜱體內萊姆病病原的試劑盒，其特征是萊母病病原螺旋體通用探針的序列為ctttgaccatatttttatcttcca；B.buredorferi?sensu?stricto特異性寡核苷酸探針為aacaccaatatttaaaaaacataa；B.garinii特異性寡核苷酸探針為aacatgaacatctaaaaacataaa；B.afzelii特異性寡核苷酸探針為aacatttaaaaaataaattcaagg；B.valaisiana??特異性寡核苷酸探針為cattaaaaaaatataaaaaataaatttaagg；一對引物的序列各為：

上游引物：23SN2(5′-accatagactcttattactttgacca-3′)，

下游引物：5SCB(5′-biotin-gagagtaggttattgccaggg-3)。

3、權利要求1或2所述的試劑盒的使用方法，其特征是將捕捉的待檢蜱用75％酒精浸泡20min，再用生理鹽水漂洗，將其置于含有BSK?II培養基的無菌研磨器中研磨碎后再進行菌體分離與·提純，得到DNA，以所得到的DNA為模板，以試劑盒內的引物進行PCR，擴增產物和固定在Biodyne?C膜上的伯氏螺旋體的寡核苷酸進行雜交，再將Biodyne?C膜放置在塑料布或者包裝膜內，滴加A、B混合液在膜上含有寡核苷酸和PCR產物雜交的區域，用塑料層覆蓋膜，塑料薄膜封閉器封閉薄膜，將封閉好的薄膜于曝光儲片夾曝光處理，取出膠片進行顯影定影處理后觀察結果。