[發明專利]驅動蛋白樣蛋白KIF1B的轉移相關功能和預測腫瘤患者預后的標志物用途及其應用方法

無效

• 申請號: 200910133809.0
• 申請日: 2009-04-01
• 公開（公告）號: CN101851611A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 馮玉梅;李林;李曉青;郝希山
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學附屬腫瘤醫院
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12Q1/68;G01N33/573
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.驅動蛋白樣蛋白KIF1B(kinesin?family?member?1B)，也稱CMT2A(Charcot-Marie-Tooth?neuropathy?2A)的腫瘤轉移相關功能。

2.KIF1B表達水平預測乳腺癌患者預后的標志物用途，其特征在于基于KIF1B表達水平可以預測腫瘤患者的預后。

3.基于KIF1B表達水平預測腫瘤患者預后的檢測及應用方法，其特征在于：

(1)定量RT-PCR方法檢測KIF1B?mRNA表達水平：a.提取腫瘤患者原發癌組織標本的細胞總RNA；以RNA為模板逆轉錄合成cDNA；以cDNA為模板，定量PCR擴增KIF1B基因，計算基因拷貝數。定量PCR擴增包括相對定量PCR擴增和絕對定量PCR擴增：1)相對定量PCR擴增，即利用KIF1B基因和管家基因(House-keeping?gene)的特異性引物和熒光標記探針進行實時定量PCR擴增，計算KIF1B?mRNA的相對表達量為2^-ΔCt，其中，ΔCt＝Ct_KIF1B-Ct_{House-keeping?gene}(Ct值為實時定量PCR時熒光信號達到設定閾值時所經過的循環數)；2)絕對定量PCR擴增，即通過同時擴增已知KIF1B基因拷貝數的梯度稀釋樣本制作標準曲線，計算組織樣本中KIF1B?mRNA拷貝數。根據腫瘤患者復發轉移陽性病例和復發轉移陰性病例的KIF1B?mRNA相對表達量或絕對表達量，確定其用于預后判斷的臨界值，KIF1BmRNA表達量高于臨界值的患者預后好，而低于臨界值的患者預后差。

(2)分子雜交方法檢測KIF1B?mRNA表達水平：采用KIF1B的cDNA探針或cDNA序列的寡核苷酸探針，與從腫瘤患者腫瘤組織標本中提取的RNA為模板逆轉錄合成的cDNA或cDNA的擴增產物(cRNA)進行分子雜交，通過雜交后的信號強度確定KIF1B的基因表達量。根據腫瘤患者復發轉移陽性病例和復發轉移陰性病例的KIF1B?mRNA表達量，確定其用于預后判斷的臨界值，KIF1B基因表達量高于臨界值的患者預后好，而低于臨界值的患者預后差。

(3)免疫染色方法檢測蛋白表達水平：免疫染色包括免疫熒光、免疫組織化學、免疫細胞化學等，利用應該酶標記或熒光標記的抗KIF1B蛋白的特異性抗體與腫瘤組織細胞或細胞裂解液進行免疫反應，通過檢測熒光或酶作用底物后的產生的顏色和吸光度值確定癌組織細胞中KIF1B蛋白的表達水平，再依據KIF1B蛋白表達水平預測患者預后。

(4)免疫印跡(Western?blot)方法檢測蛋白表達水平：是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離裂解后的組織細胞的蛋白質，再將蛋白質轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，然后利用抗KIF1B蛋白特異性抗體與固相載體上的蛋白發生免疫反應，再與酶、同位素或熒光標記的第二抗體起反應，經過底物顯色、化學發光或放射自顯影檢測KIF1B蛋白在組織細胞中的表達量。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于以原發癌組織中KIF1B?mRNA或蛋白表達量為某一特定閾值作為對腫瘤患者預后判斷的臨界值，高于臨界值的患者則判斷為預后好，低于該臨界值則判斷為預后差。