[發明專利]針對非功能性P2X7受體的抗體及其在癌癥和其它病情的診斷和治療中的用途

有效

• 申請號: 200910132801.2
• 申請日: 2002-01-17
• 公開（公告）號: CN101555283A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: J·A·巴登;A·基得利-拜爾德
• 申請（專利權）人: 因特里特控股有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K14/705;G01N33/53;G01N33/574;G01N33/569;A61K39/395;A61K38/17;A61P35/00;A61P31/06;A61P31/18;A61P1/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

本申請是2002年01月17日提交的02805078.9號發明專利申請 “針對非功能性P2X₇受體的抗體及其在癌癥和其他病情的診斷和治 療中的用途”的分案申請。

技術領域

本發明涉及疾病的診斷和治療，包括腫瘤。本發明所涉及的疾病 類型包括來自于上皮細胞的腫瘤和惡性淋巴瘤。本發明還涉及其它病 情，如癌前狀態、腸道易激綜合癥以及病毒和其它感染。很有可能本 發明還適用于其它疾病和病情。

背景技術

三磷酸腺苷(ATP)能活化配體門控的嘌呤源受體，已知為P2X受 體。受體亞型從P2X₁到P2X₇已被識別。已知不同的P2X受體亞型存 在于許多細胞中，包括上皮細胞和白細胞、淋巴細胞、胸腺細胞、巨 噬細胞和樹突狀細胞。

P2X受體能透過鈣離子和一些其它陽離子，如鉀離子和鈉離子。 鈣離子流通過P2X受體進入細胞可能與細胞死亡相聯系。

在許多細胞型中，P2X₇亞型被認為與細胞凋亡或程序化細胞死亡 有關。當存在ATP時，表達于細胞表面上的P2X₇受體能在1秒鐘內 打開鈣離子通道，通過細胞膜。繼續暴露在ATP中可在幾秒鐘到幾十 秒鐘內導致大孔的形成，這些大孔可使細胞淹沒在過量的鈣中，誘導 細胞凋亡。

例如在上皮癌細胞中，暴露給ATP通常并不導致細胞凋亡。已經 發現某些細胞表達不能形成孔的P2X₇受體。這些受體被認為是非功 能性受體。

在人類癌細胞系，如前列腺PC3和乳腺MCF7，以及在動物細胞系包 括嚙齒動物雜交瘤中，P2X₇受體被發現在細胞表面上以非功能構象存在。

惡性淋巴瘤患者的B細胞可表達非功能性P2X₇受體。淋巴瘤由逃 避細胞溶解破壞的惡性克隆發展而成。該過程導致惡性B淋巴細胞漸 漸積累并最終導致淋巴結病和/或脾腫大。

發明簡述

本發明的第一方面提供了一種可用于檢測疾病或者病情的探針， 該探針適用于區別功能性P2X₇受體和非功能性P2X₇受體。優選的， 該探針通過測定ATP與受體結合后的變化或者測定結合P2X₇受體中 的孔形成所必需的一種或多種蛋白后的變化來區別功能性和非功能性 P2X₇受體。在一種可替代的具體示例中，該探針可檢測在不存在結合 ATP時暴露的P2X₇受體的一個或多個部分。該受體部分可能包括P2X₇單體。

本發明還提供了一種檢測疾病或病情的方法，該方法包括以下步 驟：用本發明的探針區別功能性P2X₇受體和非功能性P2X₇受體；提 供一種受體表達譜圖；和比較該受體表達譜圖與正常譜圖。可以像例 如前面就探針本身所提到的那樣檢測變化。

該探針可以是天然的或者是人工的。優選的，該探針是一種抗 體，該抗體可以是多克隆、單克隆、重組的、人源化抗體或者是它們 的合適片段。該抗體優選地針對于位于與ATP結合位點相鄰的胞外域 內的表位。

在人P2X₇受體的情況下，該探針優選適于區別功能性受體和非功 能性受體，該功能性受體具有其中Pro210位于反式構象的序列；該 非功能性受體具有其中Pro210位于順式構象的序列。

該探針可用任何一種合適的技術制備，該技術很容易為本領域中 的熟練技術人員理解。

在本發明的范圍內還包括該探針能通過檢測發生在ATP結合位點 的其它構象變化來區別功能性和非功能性受體。例如，所測定的變化 可以是不同于上面所指的脯氨酸的氨基酸。這種氨基酸的示例之一是 Pro199。在另一個示例中，所測定的變化可以是其它方面。

該探針也可適用于檢測不受功能狀態改變的P2X₇受體的其它區 域。當選擇的表位可特異地檢測只有在未結合ATP時才易于接近的受 體表面區域的形狀時，缺乏結合型ATP的單體亞基的構象可用該探針 測定。該探針可檢測孔形成所必需的一種或多種蛋白如附屬蛋白或其 它蛋白結合的變化。這種蛋白的非限制性示例為層粘連蛋白，整聯蛋 白，β-肌動蛋白，α-輔肌動蛋白和supervillin。