[發明專利]COPPOCK白內障致病基因及其檢測方法

有效

• 申請號: 200910131574.1
• 申請日: 2009-04-07
• 公開（公告）號: CN101525620A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 張璐;劉平
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨;李新軍

技術領域

本發明涉及的是一種人體變異的基因，具體地說是一種COPPOCK白內障致病基因GJA3。本發明還涉及這種變異基因在檢測疾病中的應用。

背景技術

先天性白內障(congenital?cataract，CC)是一種常見的眼部異常，可導致明顯的視力障礙或者兒童盲，約占世界兒童盲的1/10。先天性白內障可以孤立發生，可以合并其它眼部發育異常，或者是遺傳性多系統綜合癥的一部分。大約1/3-1/4的先天性白內障是遺傳性的，常染色體顯性、常染色體隱性和X-連鎖三種遺傳方式都有報道。遺傳性先天性白內障大多是常染色體顯性，幾乎完全外顯但是表現度各不相同。盡管先天性白內障是世界兒童盲的主要原因，其遺傳基礎和發病機制尚不十分清楚。對先天性白內障致病基因的定位與克隆是了解其發病的分子機制的重要步驟。

近年來，隨著分子生物學技術和生物信息學的迅猛發展，越來越多的先天性白內障致病基因被定位和克隆。迄今為止，對常染色體顯性遺傳先天性白內障，已明確定位的位點有30余個，已找到的致病基因有20余個。先天性白內障的致病基因目前可以分成5類：(1)晶體蛋白基因，包括CRYAA，CRYAB，CRYBB1，CRYBB2，CRYBB3，CRYBA1/A3，CRYBA4，CRYGC，CRYGD，和CRYGS。(2)膜蛋白基因，包括MIP，LIM2.(3)縫隙連接蛋白基因，包括GJA8，GJA3。(4)細胞骨架蛋白基因，包括BFSP1，BFSP2。(5)發育調節因子基因，包括PITX3，MAF，HSF4，FOXE3，EYA1，CHX10，和PAX6等。

中國專利申請200710144506.X公開了CRYGC基因變異與先天性核性白內障的關系，CRYGC基因第3外顯子第470堿基一個G-＞A的點突變，導致編碼第157位色氨酸的密碼子變成了終止密碼子(W157X)。并確定該點突變是先天性核性白內障的致病基因突變。

由于先天性白內障的臨床癥狀及實驗室檢測指征具有許多類型，而且研究顯示，不同的臨床類型分別與不同的基因突變相關。即使是同一基因，點突變的位點不同，由此導致先天性白內障的癥狀就有可能不同。因此有必要對白內障的各種臨床類型，尤其是還沒有發現相關的分子遺傳學基礎的臨床類型進行研究，以確定其精確的變異基因名稱和位點，并根據該變異建立起方便、快速和準確的檢測方法，用于先天性白內障的診斷。

發明內容

本發明的目的在于提供COPPOCK白內障，也稱為核性顆粒狀白內障的致病基因，定位出該疾病的基因突變位點，并利用該基因突變，提供檢測人體中是否存在該基因突變的方法。

本發明針對一個COPPOCK白內障家系，用基因掃描與連鎖分析的方法對致病基因進行染色體定位和候選基因突變檢測。在排除了大部分先天性白內障相關染色體區域后，將致病基因初步定位于第13號染色體。經過精確定位，將致病基因定位于染色體13q11-12。通過對此定位區域內先天性白內障的候選基因GJA3基因雙向測序發現一個新的點突變。通過對家系正常成員和100名正常對照GJA3基因測序未發現此突變，排除了單個核苷酸多態性(single?nucleotide?polymorphism，SNP)的可能性。從而確定GJA3基因突變是COPPOCK白內障的致病基因突變。由此，

本發明提供了一種如SEQ?ID?NO：1所示的變異的人類GJA3基因，其特征在于，所述GJA3基因第1外顯子第427位堿基的G突變為A。正常的人類GJA3基因如SEQ?ID?NO：2所示。

本發明還提供了一種含有上述述基因的點突變的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點突變向兩側或一側延伸至少50個以上至1000個堿基之間長度的核苷酸。

本發明進一步提供了所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點突變向兩側或一側延伸至少300-600個個堿基之間長度的核苷酸。

本發明還提供了一種檢測來源于人體的生物樣本中是否存所述基因的點突變的方法，其包括步驟：

(1)從所述樣本中提取和純化基因材料；

(2)對所述基因材料進行聚合酶鏈擴增反應，獲取產物；

(3)對所述產物進行核苷酸序列測定，以確定所述生物樣本中是否含有GJA3基因的點突變。

優選地，所述生物樣本為體液，所述體液包括但不限于：血液、血清、羊水、淋巴液等。

優選地所述體液為血液。