[發明專利]分離丙型肝炎病毒肽的方法

無效

• 申請號: 200910130605.1
• 申請日: 2003-08-27
• 公開（公告）號: CN101525375A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: M·比施勒;A·哈貝爾;C·克雷德;F·麥特內爾;O·奧塔瓦;O·維特維斯卡;W·扎內爾;S·津克;H·克拉普斯
• 申請（專利權）人: 英特塞爾股份公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/18;C40B30/04;A61K39/29;A61K48/00;A61K35/12;A61P31/14;C12N5/08;C12Q1/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

1.分離具有結合MHC/HLA分子的能力的丙型肝炎病毒肽(HP)， 或含有該HCV肽與該MHC/HLA分子的復合物的方法，該方法的特征在 于下列步驟：

—提供一個HCV肽庫，該庫含有可與該MHC/HLA分子結合的HCV 肽和不與該MHC/HLA分子結合的HCV肽，

—使該MHC/HLA分子接觸該HCV肽庫，從而使具有結合該 MHC/HLA分子的能力的HCV肽與該MHC/HLA分子結合，形成含有 該HCV肽和該MHC/HLA分子的復合物，

—檢測該復合物，任選地使其與不結合該MHC/HLA分子的HCV肽 分離，和

—任選地從該復合物中分離并表征該HCV肽。

2.分離具有結合MHC/HLA分子的能力的HCV?T細胞表位，或含 有該表位與該MHC/HLA分子的復合物的方法，該方法的特征在于下列 步驟：

—提供一個HCV肽庫，該庫含有可與一種MHC/HLA分子結合的 HCV肽和不與該MHC/HLA分子結合的HCV肽，

—使該MHC/HLA分子接觸該HCV肽庫，從而使具有結合該 MHC/HLA分子的能力的HCV肽與該MHC/HLA分子結合，形成含有 該HCV肽和該MHC/HLA分子的復合物，

—檢測該復合物，任選地使其與不結合該MHC/HLA分子的HCV肽 分離，

—任選地從該復合物中分離并表征HCV肽，

—在T細胞測定法中測定所述任選地分離的HCV肽或該復合物的T 細胞激活能力，和

—提供具有T細胞激活能力的任選地分離的HCV肽作為HCV?T細 胞表位或復合物。

3.根據權利要求1或2的方法，其特征在于該HCV肽集合選自： 肽庫、特別是重疊肽的庫；蛋白質片段庫；修飾肽庫；由抗原呈遞細胞獲 得的庫，優選地是其總裂解物或級分的形式，特別是從這些細胞的表面或 MHC/HLA分子上洗脫的級分；包含細胞片段，特別是含HCV的細胞、 腫瘤細胞或組織，特別是來自肝臟的庫；包含肽文庫的庫；由重組DNA 文庫產生的(多)肽的庫，特別是來源于病原體或腫瘤細胞的；來自HCV 的蛋白質和/或蛋白質片段的庫；或其混合物。

4.根據權利要求1-3中任一項的方法，其特征在于所述MHC/HLA 分子選自：HLA?I類分子、HLA?II類分子、非傳統MHC/HLA和 MHC/HLA-樣分子或其混合物，或它們的混合物。

5.根據權利要求1-4中任一項的方法，其特征在于利用選自如下的 方法表征該復合物的HCV肽：質譜法；多肽測序；結合測定，特別是SDS- 穩定性測定；通過測定保留因子鑒定HCV肽，方法是層析，特別是HPLC， 或其它光譜技術，特別是紫外線(UV)、紅外線(IR)、核磁共振(NMR)、圓 二色性(CD)或電子自旋共振(ESR)，或其組合。

6.根據權利要求1-5中任一項的方法，其特征在于它與一種細胞因 子分泌測定組合，優選地與Elispot測定、細胞內細胞因子染色、FACS 或ELISA組合。

7.根據權利要求1-6中任一項的方法，其特征在于所述T細胞測定 包括該復合物與分離的T細胞混合并溫育，隨后測定所述分離的T細胞 之細胞因子分泌或增殖。

8.根據權利要求1-6中任一項的方法，其特征在于所述T細胞測定 包括測量激活標記，特別是CD69、CD38的上調，或表面標記，特別是 CD3、CD8或TCR的下調。

9.根據權利要求1-8中任一項的方法，其特征在于所述T細胞測定 包括特別是通過實時RT-PCR測量參與T細胞激活的mRNA之上調/下 調。