[發(fā)明專利]一種利用電荷識(shí)別效應(yīng)測(cè)定多巴胺的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910114542.0
• 申請(qǐng)日: 2009-11-10
• 公開（公告）號(hào): CN101710095A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建平;劉蓉;魏小平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 桂林理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/48
• 分類號(hào): G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用電荷識(shí)別效應(yīng)測(cè)定多巴胺的方法，可用于人體血清樣品 中多巴胺的測(cè)定。

背景技術(shù)

多巴胺(3，4-二羥基-β-苯乙胺，DA)是一種非常重要的神經(jīng)遞質(zhì)，且與帕金 森病、亨丁頓舞蹈癥和多動(dòng)癥等病癥息息相關(guān)。目前，測(cè)量DA濃度的方法有很 多，電化學(xué)方法因靈敏度高、選擇性好而廣泛應(yīng)用，尤其是電化學(xué)型生物傳感 器能夠進(jìn)行活體分析，這一優(yōu)點(diǎn)是其他方法無(wú)法比擬的。金剛石電極、玻碳電 極、鉑電極和金電極等裸電極都可以用來(lái)測(cè)DA，但抗壞血酸(AA)和尿酸(UA)因 為氧化還原電位與DA相近，從而干擾最終測(cè)定結(jié)果。為了解決這個(gè)問題，人們 做出了很多努力，例如：離子交換膜、離子液體-凝膠膜、聚合膜和自組裝膜等。 離子交換膜中最典型的膜就是Nafion膜，但Nafion膜有常見的幾個(gè)缺點(diǎn)：膜 厚度不均一、重現(xiàn)性差、響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、價(jià)格昂貴，而自組裝能夠克服Nafion 膜的這些缺點(diǎn)。二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)是一個(gè)由五個(gè)羧基(pKa(電離平衡 常數(shù))1.9，2.9，4.4，8.7，10.5)修飾二乙三胺的無(wú)機(jī)螯合物。目前還沒有 文獻(xiàn)報(bào)道利用DTPA螯合物的靜電識(shí)別來(lái)測(cè)定DA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度高、選擇性好可以對(duì)人血清樣品中的多 巴胺進(jìn)行測(cè)定的方法。

構(gòu)思如下：多巴胺在電極上明顯的氧化還原峰，但是與多巴胺一同存在于 血液中的抗壞血酸也有明顯的氧化還原峰，且峰電位與多巴胺的峰電位相近。 通過二亞乙基三胺五乙酸的電荷識(shí)別作用，多巴胺在電極上有響應(yīng)，而抗壞血 酸和尿酸則幾乎沒有響應(yīng)，從而達(dá)到消除干擾的目的。

其基本原理是：在pH為7.4的磷酸緩沖溶液中，二亞乙基三胺五乙酸有五 個(gè)羧基(pKa?1.9，2.9，4.4，8.7，10.5)，易帶負(fù)電荷；多巴胺(pKa＝8.87) 易帶正電荷；而AA(pKa＝4.1)易帶負(fù)電荷。根據(jù)電荷識(shí)別效應(yīng)，帶負(fù)電荷的二 亞乙基三胺五乙酸吸引正電荷的多巴胺而排斥帶負(fù)電荷抗壞血酸，從而消除了 抗壞血酸的干擾。

具體步驟如下：

一、金電極的處理：

將金電極用氧化鋁粉拋光，依次在硝酸(體積比為1∶1)、無(wú)水乙醇和純水 泡洗，取出后超聲洗滌5min，即得到干凈的裸金電極。

二、修飾電極的制備：

首先將金電極放入10-15mL含0.01mol/L半胱氨酸的0.1mol/L的HCl 溶液中6h，即制得半胱氨酸修飾電極。然后電極再次在10-15mL含有0.02mol/L 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和0.04mol/L?N-羥基琥珀酰亞 胺的0.05mol/L二亞乙基三胺五乙酸的混合溶液中浸泡5h，即制得二亞乙基三 胺五乙酸/半胱氨酸/金修飾電極。

三、干擾實(shí)驗(yàn)：

相對(duì)于5×10^-6mol/L的多巴胺、5×10^-5mol/L的抗壞血酸和5×10^-5mol/L尿 酸分別使多巴胺的峰電流增大了0.2％和1.2％，表明5×10^-5mol/L的抗壞血酸 和5×10^-5mol/L尿酸對(duì)5×10^-6mol/L的多巴胺無(wú)明顯干擾，充分表明三胺五乙 酸/半胱氨酸膜有良好的選擇性。

四、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制：

取20mL小燒杯，加入含0.1mol/L?KCl的0.2mol/L磷酸緩沖溶液10mL， 逐次加入25μL?5.0×10^-5、5.0×10^-6mol/L多巴胺溶液，根據(jù)多巴胺濃度c 與峰電流i寫出線性方程為i(μA)＝-3.8575c-0.8750×10^-2，相關(guān)系數(shù)R為 0.9971。

五、人體血清樣品中多巴胺含量的測(cè)定：

將0.5mL除掉人血清白蛋白(HAS)后的血樣加入到4.5mL?0.2mol/L的磷酸 緩沖溶液中，用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)人血清樣品中多巴胺的濃度，并測(cè)量加標(biāo)回收率。

本發(fā)明能夠用來(lái)測(cè)量血清中多巴胺的濃度，且制作簡(jiǎn)單，使用方便。

附圖說(shuō)明