[發明專利]一種基于固定化方法的脂肪酶固定方法及其在阿魏酸酯化反應中的應用

無效

• 申請號: 200910112638.3
• 申請日: 2009-10-15
• 公開（公告）號: CN101712951A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 陳必鏈;黃鍵;劉煥珍;王明茲;鄭麗妃
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08;C12P33/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;吳欽緣

1.一種基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶固定方法，將離子交換樹脂，分別用熱水進行第一輪、第二輪浸洗；水洗后，先后使用NaOH溶液、NaCl溶液、鹽酸緩慢流過樹脂進行預處理，得到大孔吸附樹脂，其特征是：將1.0g-2.5g脂肪酶粉溶于磷酸鹽緩沖液中，離心棄去沉淀后，吸取40mL上清酶液并加入10g-50g大孔吸附樹脂，而后置于30℃恒溫振蕩搖床中平衡吸附；過濾后得大孔吸附樹脂固定化的脂肪酶。

2.根據權利要求1所述的一種基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶固定方法，其特征是：脂肪酶的固定過程中，脂肪酶粉溶于磷酸鹽緩沖液時，磷酸鹽緩沖液的使用量為45mL-70mL，摩爾濃度為0.1mol/L，pH值為7.5-9.0。

3.根據權利要求1所述的一種基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶固定方法，其特征是：脂肪酶的固定過程中恒溫振蕩搖床中平衡吸附時間為8h-10h，搖床轉速80rpm；過濾后去除溶液，用磷酸鹽緩沖液淋洗3次，冷凍干燥。

4.根據權利要求1所述的一種基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶固定方法，其特征是：所述的脂肪酶是指黑曲霉、米曲霉、擴展青霉或洋蔥假單胞菌產生的脂肪酶。

5.一種基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶在阿魏酸酯化反應中的應用，其特征是阿魏酸酯化反應采用雙有機試劑異辛烷/丁酮或以純離子液1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽為溶劑。

6.根據權利要求5所述的基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶在阿魏酸酯化反應中的應用，其特征是當以雙有機試劑異辛烷/丁酮為溶劑時，異辛烷/丁酮的混合體積比為85∶15，阿魏酸用量3.0mg-20.0mg，油醇用量98mg，異辛烷/丁酮用量10mL，分子篩100mg，大孔吸附樹脂固定化脂肪酶用量30-300mg，酯化反應溫度65℃，搖床轉速150rpm，酯化反應8天。

7.根據權利要求5所述的基于固定化方法的以離子交換樹脂為載體的脂肪酶在阿魏酸酯化反應中的應用，其特征是當以純離子液為溶劑時，加入阿魏酸用量3.0-20.0mg，純離子液用量1.5mL、油醇用量45mg、固定化脂肪酶用量為30-200mg，酯化反應溫度75℃，搖床轉速為300rpm，反應6天。