[發明專利]一種細胞核移植方法

有效

• 申請號: 200910107266.5
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN101580828A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發明（設計）人: 杜玉濤;王俊;汪建;楊煥明
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/06
• 分類號: C12N15/06
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所
• 代理人: 楊 宏

技術領域

本發明涉及胚胎學領域，尤其涉及一種細胞核移植方法。

背景技術

“克隆”是英文“clone”音譯，是指一個動物經無性繁殖可孤雌生殖產 生的后代，克隆的所有后代的遺傳組成是完全相同的，又稱無性繁殖細胞 系。

動物克隆是指由一個動物不經過有性生殖的方式而直接獲得與親本具 有相同遺傳同質性后代的過程，包括孤雌激活生殖、同卵雙生、胚胎分割 以及核移植等。目前動物克隆主要通過細胞核移植及胚胎分割兩種方法獲 得，正常發育為具有相同遺傳物質的新個體。

核移植是通過顯微操作，電融合等實驗室手段，將發育一定階段的核 供體，如胚胎細胞或體細胞，及相應發育階段的核受體進行體外重構，如 去核的原核胚或成熟卵母細胞。通過重構胚的胚胎移植，達到大量生產遺 傳同質哺乳動物的一種生物工程技術。運用核移植方法，成功的獲得一只 克隆動物，需有效地完成下述過程：供體細胞的選擇和處理、受體卵母細 胞的獲得與處理、在顯微操作儀下用顯微操作針顯微取核或用刀片切除法 去核，進行注射細胞、核質融合和卵母細胞激活、重構胚的體外培養以及 胚胎移植和體內發育。

以上方案中，細胞核移植過程中去核步驟采用了用顯微操作針顯微取 核，或用刀片切除法去核，這種操作步驟不僅繁瑣，而且需要手工進行， 容易導致操作失誤，不能很好的保證細胞核移植的成功率。

因此，現有技術還有待改進和提高。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的上述缺點，提供一種無需采用顯微 操作儀機械法，或刀片切除法去除受體卵母細胞細胞核的，易于操作、且 能快速準確去核的細胞核移植方法。

本發明的技術方案如下：

一種細胞核移植方法，包括以下步驟：

A、構建卵母細胞；

B、采用濃度為0.05～20ug/ml的去核試劑，將所述卵母細胞處理0.5～ 26小時，獲得細胞質體；

C、構建具有所需遺傳特性的供體細胞或細胞核，將細胞質體與所述供 體細胞或細胞核融合，得到重建的胚胎。

本發明所述的方法，其中，所述卵母細胞為需透明帶附著的卵母細胞。

本發明所述的方法，其中，所述卵母細胞為去透明帶的卵母細胞。

本發明所述的方法，其中，所述步驟B中，所述去核試劑的濃度為0.1～ 10ug/ml，處理所述卵母細胞的時間為0.5～20小時。

本發明所述的方法，其中，所述去核試劑為防線菌素、阿霉素、柔紅 霉素、普卡霉素、光輝霉素、蠅蕈素和二氯苯并咪唑呋喃型核糖苷中的一 種或幾種。

本發明所述的方法，其中，所述卵母細胞來源于哺乳動物。

本發明所述的方法，其中，所述哺乳動物是豬。

本發明通過使用去核試劑滅活卵母細胞來去除卵母細胞的細胞核，取 代現有技術的細胞核移植技術中需要機械操作去除卵母細胞細胞核的步 驟，簡化了該步驟的操作，可廣泛應用于多種物種的細胞核移植操作中。

附圖說明

圖1是本發明實施例的細胞核移植方法流程圖。

具體實施方式

以下結合附圖，對本發明的較佳實施例加以詳細說明。

本發明提供的細胞核移植方法流程圖如圖1所示，具體包括以下步驟：

S101、構建卵母細胞；

本發明方法的所有實施例中，卵母細胞可以是任何物種的卵母細胞。 通過活體采集成熟哺乳動物卵母細胞，或從離體卵巢上抽出后，經過體外 成熟獲得。本發明的具體實施例中，哺乳動物優選為豬。從離體卵巢上采 集卵子，包括卵巢的采集，卵子的采集和卵子的成熟培養。

S102、采用去核試劑處理所構建的卵母細胞，獲得細胞質體；