[發明專利]一種純化卡貝縮宮素的方法

有效

• 申請號: 200910106758.2
• 申請日: 2009-04-21
• 公開（公告）號: CN101531705A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 程生強;覃亮政;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳市翰宇藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20;C07K1/18;A61P15/04
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所
• 代理人: 胡吉科;韓英杰

技術領域

本發明涉及一種多肽的純化方法，尤其涉及卡貝縮宮素純化的方法。

背景技術

卡貝縮宮素(Carbetocin)是一種合成的具有激動劑性質的長效催產 素九肽類似物。硬膜外或腰麻下剖腹產術后可以立即單劑量靜脈給藥，以 預防子宮張力不足和產后出血。

卡貝縮宮素的臨床和藥理特性與天然產生的催產素類似。像催產素一 樣，卡貝縮宮素與子宮平滑肌的催產素受體結合，引起子宮的節律性收縮， 在原有的收縮基礎上，增加其頻率和增加子宮張力。在非妊娠狀態下，子 宮的催產素受體含量很低，在妊娠期間增加，分娩時達高峰。因此卡貝縮 宮素對非妊娠的子宮沒有作用，但是對妊娠的子宮和剛生產的子宮具有有 效的子宮收縮作用。

不論是靜脈注射還是肌肉注射卡貝縮宮素后，子宮迅速收縮，可在2 分鐘內達到一個明確強度。單劑量靜脈注射卡貝縮宮素對子宮的活性作用 可持續大約1個小時，因此足以預防剛生產后的產后出血。產后給予卡貝 縮宮素后，在收縮的頻率與幅度方面都比催產素要長，并且對有出血傾向、 需額外使用縮宮素者，卡貝縮宮素耐受性好，與縮宮素一樣有效甚至更有 效。

目前臨床常用的促進子宮縮收藥物麥角新堿，會導致惡心、嘔吐、高 血壓和冠脈痙攣等。卡貝縮宮素是一種長效的類催產素藥物。與麥角新堿 相比，使用卡貝縮宮素在預防陰道分娩婦女的產后出血方面同樣有效，并 且惡心、嘔吐、高血壓的發生比例顯著降低。

因此卡貝縮宮素在臨床上有很好的應用前景，具有很高的開發價值。

目前，還沒有文獻具體研究卡貝縮宮素相關純化的方法，特別是純化 的規模化方法，本發明不僅能得到HPLC純度大于98％的精肽，而且能夠規 模化生產，達到純度高、收率高、產業化的要求。

發明內容

本發明提出了一條適于產業化純化卡貝縮宮素的工藝方法，使用反相 高效液相色譜法純化純卡貝縮宮素，純度高且收率好，達到產業化要求。

為實現上述目的，本發明的技術方案包括以下步驟：

a、卡貝縮宮素粗肽溶液用反相色譜柱為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為 A相、乙腈為B相，進行梯度洗脫純化，其中：梯度：B％：20-40％，A相 的pH為2.5-3.5；

b、采用陰離子交換法將磷酸鹽、三氟醋酸鹽轉成醋酸鹽。

所述的反相色譜柱為采用了反相色譜填充材料的色譜柱。

具體實施方式

樣品處理：卡貝縮宮素粗肽溶液配制成300-500mg/mL，用濾膜過濾后 收集濾液備用。所述卡貝縮宮素粗肽可以是純度不符合藥用標準、或者純 度不符合工業應用目的或者為通過固相合成法獲得而未經純化的卡貝縮宮 素。

純化：純化條件：

色譜柱：

使用反相色譜柱為固定相的色譜柱，優選十八烷基硅烷鍵合硅膠為填 充材料的色譜柱。色譜柱直徑和長度為：15cm×25cm，30cm×25 cm，或5cm×25cm。

流動相：

A相：使用磷酸二氫鈉和磷酸的緩沖溶液，pH為2.5-3.5，優選pH為 2.8-3.3。配制方法：緩沖溶液采用磷酸二氫鈉水溶液用磷酸溶液調至需要 的pH，磷酸優選分析純的磷酸。

B相：乙腈，優選色譜純乙腈。流速為：450-550ml/min，20000-2200 ml/min。，或60-80ml/min。檢測波長：230nm。梯度：B％：20％-40％，優 選24％～38％。進樣量為1-70g，優選進樣量為1.5-2g、10-15g或50-65 g。

純化過程：將色譜柱用50％以上的乙腈沖洗干凈后上樣，線性梯度洗脫 50-85min，優選56-64min，60-80min，或者56-64min。收集目的峰，將 收集的目的肽溶液于水溫不超過32℃下減壓旋蒸濃縮后備用。