[發(fā)明專(zhuān)利]對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910106580.1
• 申請(qǐng)日: 2009-04-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101525649A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盛司潼
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 盛司潼
• 主分類(lèi)號(hào): C12P19/34
• 分類(lèi)號(hào): C12P19/34
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物樣品的制備和處理，更具體地說(shuō)，涉及一種對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法。

背景技術(shù)

在現(xiàn)階段，若要對(duì)基因片段進(jìn)行測(cè)序或者數(shù)據(jù)分析，需執(zhí)行如下步驟：首先從生物個(gè)體，例如組織細(xì)胞、細(xì)菌等提取基因材料(RNA)，并利用轉(zhuǎn)錄和合成得到DNA片段，一般通過(guò)這種方法得到的DNA片段都是少量的；然后對(duì)DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，例如可以利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase?ChainReaction，PCR)、轉(zhuǎn)錄法等進(jìn)行擴(kuò)增，得到大量的基因片段；最后基于擴(kuò)增后的基因片段進(jìn)行測(cè)序或數(shù)據(jù)分析。

但是在上述現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)多個(gè)DNA片段直接進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，由于序列長(zhǎng)短不一致和序列本身的差異，會(huì)使得放大效率不一，往往存在比較嚴(yán)重的非線(xiàn)性化，即不同DNA片段的比例失真。因此需要一種對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法，來(lái)保證擴(kuò)增過(guò)程的保真度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)多個(gè)DNA片段同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)存在的比例失真問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，所述對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法包括以下步驟：

A.將結(jié)合在磁珠上的多個(gè)初始DNA片段酶切成長(zhǎng)度相等的多個(gè)DNA標(biāo)簽；

B.將每一DNA標(biāo)簽連接一段通用序列。

其中，步驟A之前還包括：將初始DNA片段結(jié)合到磁珠上。

其中，步驟A包括：

A1.對(duì)結(jié)合在磁珠上的多個(gè)初始DNA片段進(jìn)行第一次酶切；

A2.在酶切位點(diǎn)連接包含酶切序列及擴(kuò)增引物的接頭序列；

A3.利用所述酶切序列對(duì)多個(gè)初始DNA片段進(jìn)行第二次酶切，得到長(zhǎng)度相等的多個(gè)DNA標(biāo)簽。

其中，所述步驟A1包括：利用限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)結(jié)合在磁珠上的多個(gè)初始DNA片段進(jìn)行第一次酶切。

其中，所述酶切序列是typeIIs酶。

其中，所述擴(kuò)增引物可以是聚合酶鏈反應(yīng)引物，或帶有RNA轉(zhuǎn)錄酶初始序列的轉(zhuǎn)錄引物。

其中，步驟B包括：

B1.將所述DNA標(biāo)簽結(jié)合到磁珠上；

B2.在所述第二次酶切的酶切位點(diǎn)，將DNA標(biāo)簽連接一段通用序列。

其中，所述通用序列的長(zhǎng)度不小于DNA標(biāo)簽的長(zhǎng)度。

其中，所述步驟B之后還包括步驟：C.對(duì)連有通用序列的每一DNA標(biāo)簽進(jìn)行擴(kuò)增。

其中，若擴(kuò)增引物是聚合酶鏈反應(yīng)引物，則步驟C利用聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)增；若擴(kuò)增引物是帶有RNA轉(zhuǎn)錄酶初始序列的轉(zhuǎn)錄引物，則步驟C利用轉(zhuǎn)錄法進(jìn)行擴(kuò)增。

由上可知，本發(fā)明在對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的過(guò)程中，將每一DNA片段都處理成長(zhǎng)度相等的DNA標(biāo)簽，因此消除了長(zhǎng)度不一致對(duì)后續(xù)擴(kuò)增的影響，此外還連接了一段較長(zhǎng)的通用序列，因此減少了彼此間序列差異對(duì)擴(kuò)增的影響，從而提高了擴(kuò)增過(guò)程的保真度。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法流程圖；

圖2是圖1所示實(shí)施例中將結(jié)合在磁珠上的多個(gè)初始DNA片段酶切成長(zhǎng)度相等的多個(gè)DNA標(biāo)簽的方法流程圖；

圖3是圖1所示實(shí)施例中將每一DNA標(biāo)簽連接一段通用序列的方法流程圖；

圖4是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法流程圖；

圖5是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的示意圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

圖1示出了本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中對(duì)DNA片段進(jìn)行處理的方法流程。該方法包括：

在所有步驟之前，將初始DNA片段結(jié)合到磁珠上。

在步驟S101中，將結(jié)合在磁珠上的多個(gè)初始DNA片段酶切成長(zhǎng)度相等的多個(gè)DNA標(biāo)簽。關(guān)于步驟S101的具體過(guò)程，將在圖2中詳細(xì)闡述。

在步驟S102中，將每一DNA標(biāo)簽連接一段通用序列。關(guān)于步驟S102的具體過(guò)程，將在圖3中詳細(xì)闡述。

在步驟S103中，對(duì)連有通用序列的每一DNA標(biāo)簽進(jìn)行擴(kuò)增。

在本發(fā)明的所有步驟之前，需要得到初始DNA片段，并將其結(jié)合到磁珠上。