[發明專利]腫瘤抗原TRAG-3模擬表位肽及其應用

無效

• 申請號: 200910104554.5
• 申請日: 2009-08-06
• 公開（公告）號: CN101619092A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 朱波;林治華;王槐亮;龍海霞;程曉明;陳正堂
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明涉及一種腫瘤抗原模擬表位肽，特別涉及腫瘤抗原TRAG-3模擬表 位肽，還涉及該模擬表位肽的應用。

背景技術

惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康的高發病率和高死亡率疾病。其治療方法主 要包括手術切除、放射治療和化學藥物治療，但這些方法對某些腫瘤特別是晚 期惡性腫瘤的治療效果還不盡如人意。近年來，腫瘤免疫治療作為惡性腫瘤的 第四種治療方法得到迅速發展。已有大量文獻報道，基于腫瘤抗原細胞毒性T 淋巴細胞(CTL)表位的腫瘤疫苗在體內可有效誘導特異性殺瘤CTL的產生， 使部分患者的病情得到控制和緩解，而對正常組織無損害。因此，腫瘤疫苗的 研制具有重要意義和良好的應用前景。

隨著生物技術的發展，多種腫瘤抗原及其CTL表位被鑒定并成為腫瘤免疫 學及腫瘤疫苗發展的基礎。其中，腫瘤睪丸抗原(CT)家族是一類包含多個基 因家族的腫瘤特異性共享抗原，廣泛表達于多種實體瘤組織中，而在除睪丸、 胎盤外的其他正常組織不表達。因其在腫瘤組織表達的特異性和在體內激發細 胞免疫應答和體液免疫應答的有效性，CT抗原成為多種實體瘤特異性疫苗免疫 治療的首選抗原。

泰素耐藥相關基因(TRAG-3)編碼的TRAG-3是由Duan等在尋找泰素耐 藥基因時在泰素耐藥的卵巢癌細胞株SKOVTR中發現的一個新CT抗原，在多 種惡性腫瘤如非小細胞肺癌、軟骨肉瘤和黑色素瘤中高表達，而在除睪丸組織 外的其他正常組織(肝臟、肺臟、腎臟、胰腺、骨骼肌、胎盤、心臟和腦)中 不表達。發明人在前期研究中發現，TRAG-3_58-66(ILLRDAGLV)為HLA-A2.1 限制性CTL表位，該表位肽負載樹突狀細胞腫瘤疫苗在體外能夠有效激發抗瘤 CTL免疫反應。

但是，天然表位肽存在不易被抗原遞呈細胞攝取，易被肽酶降解等缺陷， 以其為基礎構建的腫瘤多肽疫苗不能滿足腫瘤免疫治療的要求，必須對天然表 位肽進行改造，以增加CTL免疫應答強度和抗肽酶降解能力。近年來，運用非 天然氨基酸對生物活性肽進行化學修飾，研究其構效關系，進一步發展高效肽 類似物，已成為多肽化學研究的重要手段和方向之一。運用這種方法已得到許 多具有高活性、高選擇性、半衰期長的肽類似物。因此，利用非天然氨基酸對 天然表位肽進行改造，有望獲得既能激發較強CTL免疫應答，又能抗肽酶降解 的模擬表位肽。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于利用非天然氨基酸對TRAG-3天然表位 肽(TRAG-3_58-66，ILLRDAGLV)進行改造，獲得既能激發較強CTL免疫應答， 又能抗肽酶降解的模擬表位肽；目的之二在于提供所得模擬表位肽的應用。

為達到上述目的，在本發明的第一方面，提供了一種TRAG-3模擬表位肽， 由Ile-Leu-Leu-Arg-Asp-Ala-Gly-Leu-Val所示的氨基酸序列組成，其中，第5位 Asp為D-Asp或者第6位Ala為D-Ala。

在本發明的第二方面，提供了所述TRAG-3模擬表位肽在制備治療TRAG-3 陽性腫瘤的多肽疫苗中的應用。

進一步，所述TRAG-3陽性腫瘤包括非小細胞肺癌、軟骨肉瘤和黑色素瘤。

本發明的有益效果在于：研究結果顯示，與TRAG-3天然表位肽相比，本 發明的TRAG-3模擬表位肽具有更好的抗酶降解穩定性，與HLA-A2.1具有更強 的親和力，并且對TRAG-3陽性腫瘤細胞表現出更強的CTL特異性殺傷效應； 因此，本發明的模擬表位肽可以用于制備治療TRAG-3陽性腫瘤的多肽疫苗， 在腫瘤免疫治療領域有著良好的開發應用前景。

附圖說明

為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發 明作進一步的詳細描述，其中：

圖1為TRAG-3模擬表位肽T1的空間結構模擬圖；

圖2為TRAG-3模擬表位肽T1與HLA-A2.1的復合物的空間結構模擬圖；

圖3為TRAG-3模擬表位肽T2的空間結構模擬圖；

圖4為TRAG-3模擬表位肽T2與HLA-A2.1的復合物的空間結構模擬圖；

圖5為TRAG-3模擬表位肽T1的質譜鑒定圖；

圖6為TRAG-3模擬表位肽T2的質譜鑒定圖；

圖7為TRAG-3模擬表位肽T1和T2與HLA-A2.1的親和力檢測結果圖；