[發(fā)明專利]生存素與熱休克蛋白的復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910104506.6
• 申請日: 2009-07-31
• 公開（公告）號: CN101670114A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳玉章;楊曌
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K47/42;A61K38/17;A61K39/385;A61P35/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蛋白復(fù)合物，特別涉及生存素與熱休克蛋白的復(fù)合物，還涉及該復(fù)合物的制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是嚴重危害人類健康的常見疾病。目前，惡性腫瘤的三大常規(guī)治療方法：手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)治療已取得較大發(fā)展，但是，手術(shù)治療為局部治療手段，而惡性腫瘤呈浸潤性生長且易經(jīng)過血管和/或淋巴管發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，中晚期惡性腫瘤患者單純依靠手術(shù)治療很難達到完全清除腫瘤細胞的目的；放射治療也是以局部治療為主，同樣存在手術(shù)治療的缺陷，且許多惡性腫瘤對放射治療不敏感；化學(xué)治療為全身治療手段，但存在耐藥和毒副作用大等缺點。近年來，免疫治療作為惡性腫瘤的第四種治療方法受到各國腫瘤學(xué)研究者的廣泛關(guān)注，腫瘤疫苗的開發(fā)成為研究熱點之一。

生存素(Survivin)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，具有抑制細胞凋亡和維持細胞有絲分裂的雙重功能。Survivin在正常的終末分化組織中幾乎不表達，但在幾乎所有惡性腫瘤組織中高表達，被視為最具腫瘤特異性的腫瘤共享抗原。Survivin表達水平與腫瘤惡性程度成正相關(guān)，若腫瘤組織高表達Survivin，則腫瘤細胞凋亡指數(shù)下降，對放化療的耐受性增強，預(yù)后差；反之，若腫瘤組織低表達或不表達survivin，則對放化療敏感，預(yù)后良好。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤血管內(nèi)皮細胞受到某些細胞因子如血管內(nèi)皮細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子等的刺激后可以高表達Survivin，而靜止的血管內(nèi)皮細胞幾乎不表達Survivin，因此，Survivin又被視為一種新的腫瘤新生血管標志物。以Survivin為抗腫瘤靶標具有以下獨特優(yōu)勢：(1)Survivin表達于幾乎所有腫瘤細胞中，尤其在惡性度高、耐放化療的腫瘤細胞中高表達，若腫瘤細胞為逃逸免疫監(jiān)視而下調(diào)Survivin表達，則會相應(yīng)增加其凋亡指數(shù)和放化療敏感性；(2)Survivin所誘導(dǎo)的特異性細胞免疫在殺傷腫瘤細胞的同時，還可破壞腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞，由此產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)，即使在部分腫瘤細胞逃逸免疫監(jiān)視的情況下，同樣能通過抑制血管生成而達到打擊腫瘤的目的；(3)Survivin的腫瘤治療譜相對廣泛。但是，單獨以Survivin作為腫瘤疫苗時，需要與免疫佐劑聯(lián)合應(yīng)用，而佐劑為外源性物質(zhì)且誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答特異性低，可能引起一系列的毒副反應(yīng)；此外，由于主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的限制，其使用對象也相當有限。

熱休克蛋白(Heat?Shock?Protein，HSP)是一類在生物進化中高度保守，廣泛存在于原核和真核生物中的蛋白質(zhì)，具有“分子伴侶”作用，參與胞內(nèi)蛋白質(zhì)的折疊、裝配和轉(zhuǎn)運等過程。HSP按分子量大小分為以下幾個家族：HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和小HSP家族。每個家族又由多個成員組成，如HSP70家族成員有HSP70、熱休克同源蛋白70(HSC70)、糖調(diào)蛋白(GRP)78和GRP75等，HSP90家族成員有HSP90和糖蛋白96(GP96)等。許多研究結(jié)果證實，從腫瘤組織中提取的HSP可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對該腫瘤的免疫應(yīng)答，達到治療腫瘤的目的。進一步研究表明，從腫瘤組織中提取的HSP實際為結(jié)合了抗原多肽的HSP多肽復(fù)合物，其可通過以下幾方面誘導(dǎo)機體的抗腫瘤免疫：(1)HSP多肽復(fù)合物作為完整抗原，被抗原遞呈細胞攝取、加工后，與MHC結(jié)合并遞呈到細胞表面，從而活化T細胞，包括CD4+和CD8+T細胞，特別是細胞毒性T細胞，產(chǎn)生抗腫瘤的特異性細胞免疫；HSP在此處起到載體或佐劑的作用，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的是其結(jié)合的抗原多肽；(2)HSP本身具有活化巨噬細胞和樹突狀細胞(抗原遞呈細胞)的作用，從而增加共刺激因子和MHC的表達，加強機體的抗腫瘤免疫；(3)自然殺傷細胞和γδT細胞是體內(nèi)重要的抗腫瘤免疫細胞，對腫瘤細胞的殺傷效應(yīng)不受MHC的限制，HSP可直接作為抗原遞呈分子，將抗原多肽遞呈至細胞表面，從而活化自然殺傷細胞和γδT細胞，產(chǎn)生抗腫瘤的非特異性免疫。以HSP多肽復(fù)合物為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗具有以下獨特優(yōu)勢：(1)由于HSP結(jié)構(gòu)上的高度保守，不具有多態(tài)性，可在同種內(nèi)相互使用，不受MHC的限制；(2)HSP具有免疫佐劑的作用，省略了常規(guī)蛋白免疫需要免疫佐劑的麻煩。近年來研究發(fā)現(xiàn)，GRP170也是HSP70家族的成員，是一種對較大的抗原多肽也具有伴侶作用的高分子量HSP，具有強大的免疫佐劑效應(yīng)，因此，其在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用頗受矚目。目前，以HSP多肽復(fù)合物為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗多采用HSP70、HSP90和GP96進行構(gòu)建，尚未見采用GRP170構(gòu)建腫瘤疫苗的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容