[發明專利]具有促進成纖維細胞生長因子受體3活性的多肽及其篩選方法和應用

無效

• 申請號: 200910103959.7
• 申請日: 2009-05-26
• 公開（公告）號: CN101619093A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 陳林;余瑛;黃煒;杜曉蘭;金旻;戚華兵;蘇楠;趙玲;謝楊麗;楊京;何啟芬
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學野戰外科研究所
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/22;G01N33/566;A61K38/10;A61P19/02;A61P19/08;A61P19/10
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明涉及一種多肽，特別涉及一種具有促進成纖維細胞生長因子受體3 活性的多肽，還涉及該多肽的篩選方法和應用。

背景技術

成纖維細胞生長因子受體(fibroblast?growth?f?actor?receptors，FGFRs)是一 類具有自身磷酸化活性的跨膜酪氨酸激酶受體，與其相應配體成纖維細胞生長 因子(fibroblast?growth?factors，FGFs)結合，在組織器官發育及損傷修復過程 中發揮重要作用。

目前已發現4種FGFRs，即FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。其中，FGFR3 介導軟骨內骨化的負性調節分子，在骨骼發育中具有重要作用。既往研究顯示， FGFR3功能獲得型基因突變導致骨骺生長板中軟骨細胞的增殖和分化受到抑 制，引起多種骨骼發育缺陷性遺傳疾病，如軟骨發育不全(ACH)、季肋發育不 全(HCH)和致死性骨發育不全(TD)等；而FGFR3功能缺失型基因突變導致 骨骺生長板閉合延遲、肥大軟骨區增寬和長骨過度生長等。近年來研究發現， FGFR3在骨性關節炎、骨質疏松、骨折等骨骼疾病的發生、發展中也具有重要 作用，促進FGFR3活性可以防治骨性關節炎、骨質疏松和骨折等骨骼疾病。

目前雖已發現23種FGFs，但至今未見僅與FGFR3特異性結合的FGFs。因多 肽具有分子量小、空間結構簡單、免疫原性低等優點，故開發能與FGFR3特異 性結合并促進其活性的多肽有著良好的應用前景，有望開發成為抗FGFR3功能 低下性疾病的藥物。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種具有促進FGFR3活性的多肽； 目的之二在于提供所述具有促進FGFR3活性的多肽的篩選方法；目的之三在于 提供所述具有促進FGFR3活性的多肽的應用。

為達到上述目的，在本發明的第一方面，提供了一種具有促進FGFR3活性 的多肽，由Val-Ser-Pro-Pro-Leu-Thr-Leu-Gly-Gln-Leu-Leu-Ser所示的氨基酸序列 組成。

在本發明的第二方面，提供了所述具有促進FGFR3活性的多肽的篩選方法， 包括以下步驟：

a、噬菌體12肽庫的生物淘選

將噬菌體12肽庫與包被有FGFR3的酶標板共孵育，用TBST洗去非特異 性結合的噬菌體，再用甘氨酸-鹽酸緩沖液洗脫特異性結合的噬菌體，用Tris-HCl 緩沖液中和洗脫液，得特異性結合的噬菌體，測定滴度；在宿主菌ER2738中擴 增特異性結合的噬菌體，測定滴度，作為下一輪淘選的投入噬菌體；重復上述 步驟共進行三輪淘選，富集能與FGFR3特異性結合的噬菌體；

b、噬菌體的DNA提取和測序

從第三輪淘選出的噬菌體的滴度測定平板上隨機挑取噬菌體單克隆，在宿 主菌ER2738中擴增后，提取DNA進行測序，根據所測得的DNA序列推導出 噬菌體上展示的外源多肽的氨基酸序列；

c、多肽的合成

根據所得外源多肽的氨基酸序列，人工合成多肽；

d、多肽的促FGFR3活性檢測

檢測多肽對FGFR3活性的促進作用，即得具有促進FGFR3活性的多肽。