[發(fā)明專利]腫瘤抗原Ran HLA-A*0201限制性模擬CTL表位及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910103436.2
• 申請(qǐng)日: 2009-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN101508721A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳玉章;倪兵;李凡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種腫瘤抗原模擬表位，特別涉及腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic?T?lymphocyte，CTL)表位，還涉及該模擬CTL表位的應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是當(dāng)前威脅人類生命健康的幾大主要疾病之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢(shì)，位居我國(guó)城市居民死亡原因的第一位，對(duì)其采取有效的預(yù)防和治療已經(jīng)迫在眉睫。目前，臨床上治療腫瘤的主要方法包括手術(shù)切除、放射治療和化學(xué)藥物治療，但這些方法對(duì)某些腫瘤，特別是晚期惡性腫瘤的治療效果還不能盡如人意。近年來迅速發(fā)展起來的腫瘤特異性免疫治療和腫瘤治療性多肽疫苗，基于腫瘤抗原的CTL表位，以主動(dòng)免疫方式，體內(nèi)激活免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性CTL殺傷腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常組織無損害，是一種完全、有效的腫瘤治療方法。已有眾多文獻(xiàn)報(bào)道，腫瘤抗原的CTL表位在體外、體內(nèi)均可有效誘導(dǎo)特異性殺瘤CTL的產(chǎn)生，使部分腫瘤患者的腫瘤縮小，生存期延長(zhǎng)。因此，腫瘤抗原的發(fā)現(xiàn)及其CTL表位的鑒定成為腫瘤特異性免疫治療以及腫瘤治療性多肽疫苗研制的重要前提。

Ran(ras-related?nuclear?protein)是由216個(gè)氨基酸組成的GTP酶，大量分布于細(xì)胞核內(nèi)，參與調(diào)控細(xì)胞周期中各個(gè)時(shí)期的許多細(xì)胞生命活動(dòng)，包括細(xì)胞核重建、DNA復(fù)制、細(xì)胞核物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的組裝等，為Ras類原癌基因超家族的重要成員。近來文獻(xiàn)報(bào)道，Ran是一種腫瘤相關(guān)抗原，在RNA水平上廣泛表達(dá)于多種腫瘤和正常組織中，但在蛋白水平上僅在腫瘤組織中表達(dá)，與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)移和增殖密切相關(guān)，是惡性腫瘤特異性免疫治療的良好靶標(biāo)。鑒于HLA-A^*0201是中國(guó)人群和北美高加索人種最常見的HLAI類分子型別(陽性率分別高達(dá)50％和98％)，因此，Ran?HLA-A^*0201限制性CTL表位的鑒定及其腫瘤治療性多肽疫苗的研制更具現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明人在前期研究中(Ran?HLA-A2.1限制性CTL表位的預(yù)測(cè)和初步鑒定.李凡等.免疫學(xué)雜志，第22卷第3期，2006年5月)應(yīng)用超基序和量化基序相結(jié)合的方法對(duì)Ran?HLA-A^*0201限制性天然CTL表位進(jìn)行了預(yù)測(cè)，得到4個(gè)候選天然表位，分別是YVATLGVEV、TLGVEVHPL、IMFDVTSRV和VLCGNKVD，并對(duì)4個(gè)候選天然表位與HLA-A^*0201分子的親和力和結(jié)合穩(wěn)定性分別進(jìn)行了分析，親和力實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示YVATLGVEV、TLGVEVHPL和IMFDVTSRV與HLA-A^*0201分子有中等親和力而VLCGNKVD無明顯親和力；結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示IMFDVTSRV的結(jié)合穩(wěn)定性最好而YVATLGVEV和TLGVEVHPL的結(jié)合穩(wěn)定性較差。

免疫原性弱是天然CTL表位作為腫瘤治療性多肽疫苗應(yīng)用的障礙之一。如何提高天然CTL表位的免疫原性成為腫瘤治療性多肽疫苗發(fā)展的關(guān)鍵。目前，在眾多腫瘤治療性多肽疫苗的增強(qiáng)策略中，對(duì)天然CTL表位進(jìn)行分子改造被認(rèn)為是最有前景的方法之一。由于CTL表位與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類分子的結(jié)合是誘導(dǎo)CTL免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因素，而CTL表位與MHC?I類分子結(jié)合的重要基礎(chǔ)是錨著殘基，因此，可以通過改變錨著殘基或其相鄰位置的氨基酸殘基達(dá)到增強(qiáng)免疫原性而特異性不受影響的目的。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于對(duì)前期研究中經(jīng)預(yù)測(cè)和初步鑒定的Ran?HLA-A^*0201限制性天然CTL表位進(jìn)行改造，并通過親和力實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)等篩選出免疫原性增強(qiáng)而特異性不受影響的模擬CTL表位，為腫瘤治療性多肽疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。

為達(dá)到此目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬CTL表位，由Tyr-Met-Phe-Asp-Val-Thr-Ser-Arg-Val(SEQ?ID?No.1)氨基酸序列組成。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種腫瘤治療性多肽疫苗。

為達(dá)到此目的，在本發(fā)明的第二方面，提供了一種腫瘤治療性多肽疫苗，含有免疫學(xué)有效量的所述腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬CTL表位。

進(jìn)一步，還含有藥學(xué)上可接受的載體。