[發明專利]腫瘤抗原Ran HLA-A*0201限制性模擬CTL表位及其應用

無效

• 申請號: 200910103436.2
• 申請日: 2009-03-24
• 公開（公告）號: CN101508721A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發明（設計）人: 吳玉章;倪兵;李凡
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明涉及一種腫瘤抗原模擬表位，特別涉及腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic?T?lymphocyte，CTL)表位，還涉及該模擬CTL表位的應用。

背景技術

惡性腫瘤是當前威脅人類生命健康的幾大主要疾病之一，其發病率和死亡率呈逐年上升趨勢，位居我國城市居民死亡原因的第一位，對其采取有效的預防和治療已經迫在眉睫。目前，臨床上治療腫瘤的主要方法包括手術切除、放射治療和化學藥物治療，但這些方法對某些腫瘤，特別是晚期惡性腫瘤的治療效果還不能盡如人意。近年來迅速發展起來的腫瘤特異性免疫治療和腫瘤治療性多肽疫苗，基于腫瘤抗原的CTL表位，以主動免疫方式，體內激活免疫系統，誘導產生特異性CTL殺傷腫瘤細胞，而對正常組織無損害，是一種完全、有效的腫瘤治療方法。已有眾多文獻報道，腫瘤抗原的CTL表位在體外、體內均可有效誘導特異性殺瘤CTL的產生，使部分腫瘤患者的腫瘤縮小，生存期延長。因此，腫瘤抗原的發現及其CTL表位的鑒定成為腫瘤特異性免疫治療以及腫瘤治療性多肽疫苗研制的重要前提。

Ran(ras-related?nuclear?protein)是由216個氨基酸組成的GTP酶，大量分布于細胞核內，參與調控細胞周期中各個時期的許多細胞生命活動，包括細胞核重建、DNA復制、細胞核物質轉運和細胞分裂時紡錘體的組裝等，為Ras類原癌基因超家族的重要成員。近來文獻報道，Ran是一種腫瘤相關抗原，在RNA水平上廣泛表達于多種腫瘤和正常組織中，但在蛋白水平上僅在腫瘤組織中表達，與腫瘤的惡性轉移和增殖密切相關，是惡性腫瘤特異性免疫治療的良好靶標。鑒于HLA-A^*0201是中國人群和北美高加索人種最常見的HLAI類分子型別(陽性率分別高達50％和98％)，因此，Ran?HLA-A^*0201限制性CTL表位的鑒定及其腫瘤治療性多肽疫苗的研制更具現實意義和應用價值。

本發明人在前期研究中(Ran?HLA-A2.1限制性CTL表位的預測和初步鑒定.李凡等.免疫學雜志，第22卷第3期，2006年5月)應用超基序和量化基序相結合的方法對Ran?HLA-A^*0201限制性天然CTL表位進行了預測，得到4個候選天然表位，分別是YVATLGVEV、TLGVEVHPL、IMFDVTSRV和VLCGNKVD，并對4個候選天然表位與HLA-A^*0201分子的親和力和結合穩定性分別進行了分析，親和力實驗結果顯示YVATLGVEV、TLGVEVHPL和IMFDVTSRV與HLA-A^*0201分子有中等親和力而VLCGNKVD無明顯親和力；結合穩定性實驗結果顯示IMFDVTSRV的結合穩定性最好而YVATLGVEV和TLGVEVHPL的結合穩定性較差。

免疫原性弱是天然CTL表位作為腫瘤治療性多肽疫苗應用的障礙之一。如何提高天然CTL表位的免疫原性成為腫瘤治療性多肽疫苗發展的關鍵。目前，在眾多腫瘤治療性多肽疫苗的增強策略中，對天然CTL表位進行分子改造被認為是最有前景的方法之一。由于CTL表位與主要組織相容性復合體(MHC)I類分子的結合是誘導CTL免疫應答的關鍵因素，而CTL表位與MHC?I類分子結合的重要基礎是錨著殘基，因此，可以通過改變錨著殘基或其相鄰位置的氨基酸殘基達到增強免疫原性而特異性不受影響的目的。

發明內容

有鑒于此，為克服現有技術存在的不足，本發明的第一個目的在于對前期研究中經預測和初步鑒定的Ran?HLA-A^*0201限制性天然CTL表位進行改造，并通過親和力實驗和細胞毒性實驗等篩選出免疫原性增強而特異性不受影響的模擬CTL表位，為腫瘤治療性多肽疫苗的研制奠定基礎。

為達到此目的，在本發明的第一方面，提供了腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬CTL表位，由Tyr-Met-Phe-Asp-Val-Thr-Ser-Arg-Val(SEQ?ID?No.1)氨基酸序列組成。

本發明的第二個目的在于提供一種腫瘤治療性多肽疫苗。

為達到此目的，在本發明的第二方面，提供了一種腫瘤治療性多肽疫苗，含有免疫學有效量的所述腫瘤抗原Ran?HLA-A^*0201限制性模擬CTL表位。

進一步，還含有藥學上可接受的載體。