[發明專利]尿酸酶脂質納米粒及其制備方法

有效

• 申請號: 200910103269.1
• 申請日: 2009-02-26
• 公開（公告）號: CN101816630A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 張景勍;王娜;趙春景;廖飛;董志;邱宗蔭
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K9/10;A61K38/44;A61K47/42;A61P19/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及尿酸酶脂質納米粒及其制備方法。

背景技術

細胞內核酸和核苷酸分解過程中所生成的嘌呤，在黃嘌呤氧化酶作用下轉變成尿酸。尿 酸酶(Uricase，UC)可催化尿酸氧化，生成過氧化氫(H202)和尿囊素(allantion)而排出 體外。但由于人體缺乏UC，嘌呤分解代謝只能生成尿酸經腎臟排泄。尿酸生成超過腎臟排泄 時，就會造成高尿酸血癥(血液中尿酸濃度高于0.42mmol/L)。高尿酸血癥可引發或加劇多種 疾病：惡性腫瘤化療時由于腫瘤細胞大量裂解導致的高尿酸血癥可引起代謝紊亂和腎功能衰 竭甚至死亡，即腫瘤溶解綜合征；尿酸沉積在關節內引起痛風，沉積在腎小管造成腎功能障 礙、腎小管損傷、IgA腎病炎癥；尿酸刺激血管平滑肌細胞增殖會導致內皮細胞功能障礙； 高尿酸血癥是動脈粥樣硬化等心血管疾病的重要危險因素。

目前高尿酸血癥的常用防治方案給予黃嘌呤氧化酶抑制劑(別嘌醇)存在下列缺陷：(1) 別嘌醇可阻滯尿酸生成，但會增加腎臟排泄尿酸前體(次黃嘌呤和在尿中比尿酸更難溶的黃 嘌呤)的負荷，對于伴隨高尿酸血癥產生高濃度血黃嘌呤的患者而言，雪上加霜；(2)對病 人體內已存留的尿酸，用別嘌醇治療無效；(3)別嘌醇和丙磺舒類藥物都有明顯肝腎毒性， 還易引起過敏反應。

尿囊素的優良水溶性和腎臟對尿囊素的高效排泄能力使UC有可能成為治療高尿酸血癥 的理想藥物。臨床研究表明UC可快速高效降低血尿酸，且專一性高，在治療腫瘤溶解綜合 征時，UC比別嘌呤醇更安全有效。20多年前法國和意大利批準黃曲霉UC(Uricozyme??)、 本世紀初美國和歐盟批準基因重組UC(Rasburicase)用于防治腫瘤化療時產生的高尿酸血癥。 UC也可用于治療痛風。將UC用作降低血漿尿酸的藥物存在巨大需求。

但所有的天然UC均存在內在缺陷：(1)外環境pH值對UC催化能力影響很大。UC的 最適pH值偏堿性(8.5～9.2)，pH?7.4(如血漿中)時催化能力低(苛求芽孢桿菌胞內UC僅 為最適pH值時活性的20％)，pH?5(如腎小管內)時催化能力更低。這導致UC在體內活 性較低，治療時所需劑量較大，治療成本較高，安全性低。(2)體內循環半衰期較短。UC 在生物體內不穩定，易于被蛋白酶水解失去活性。(3)易誘發機體免疫反應，產生免疫原性 和抗原反應。Uricozyme??的嚴重過敏反應發生率為5％，使用UC還常出現嘔吐(～50％)、發 燒(～46％)，惡心(～27％)等不良反應。

針對天然酶的缺陷，有下列研究：將UC吸附、共價結合于殼聚糖或葡聚糖，將UC包 埋于羧甲基直鏈淀粉或包封于紅血球中，將UC與白蛋白交聯，將PEG化UC包封于脂質體 中，將UC包封于海藻酸鹽微囊，將UC固定于金屬螯合珠(150～200μm)表面，將UC共價 結合在免疫脂質體或普通脂質體表面等。但是，以上各種方式都不能使UC在最適或接近最 適pH環境發揮催化活性，且大都存在酶易脫落、生物相容性較低、易引起凝血、穩定性和 特異性不理想等缺點。

近年來，人們用PEG修飾UC取得了一些進展，目前正在北美進行III期臨床試驗的 Puricase是PEG化UC研究最成功的例子。PEG化UC雖然在延長酶半衰期、降低免疫原 性和抗原反應性方面較天然酶有一定優勢，但仍存在一些缺點：(1)仍然是在pH?7.4而非 UC的最適pH值(8.5～9.2)發揮作用，UC活性較低，PEG化后活性更低(保留的比活性為 10％～40％)。(2)即使最優化的Puricase，靜注后的生物利用度也較天然酶低(部分原因是酶 -PEG聚合物的分子量很大)。(3)只要存在少量的大分子聚集體，PEG化UC就會產生免疫 原性。(4)PEG化UC技術要求高，工藝復雜，成本較高。

迄今為止，介導酶的半滲透性微反應系統的研究主要集中在PEG化聚乳酸/羥基乙酸 (PLGA)納米粒、PLGA微球、聚氰基丙烯酸異丁酯(PIBCA)納米粒和脂質納米粒，構建 的酶的微環境大多為中性或偏酸性，不適用于UC(見圖1)。

經查詢專利及文獻，均無人用偏堿性(pH8～9)的緩沖對構建介導尿酸酶的半滲透性偏 堿性微反應系統。而且，本專利的設計思路、配方、制備方法、得到的制劑及其特性與以前 的研究均不相同。

發明內容