[發(fā)明專利]一種含谷胱甘肽的豬精液冷凍保存液及其冷凍保存方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910100965.7
• 申請日: 2009-08-10
• 公開（公告）號: CN101622986A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爭光;俞頌東;陳阿琴;董文艷
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種含谷胱甘肽的豬精液冷凍保存液及其冷凍保存方法， 屬于家畜繁殖技術(shù)領(lǐng)域。

(二)背景技術(shù)

在我國，豬是最主要的飼養(yǎng)家畜，豬肉產(chǎn)量約占全國肉類總量的 70％。近幾年隨著人民生活水平的提高，豬的育種方向從主要著眼于生 長速度與瘦肉率的提高，轉(zhuǎn)變?yōu)楦纳曝i肉的品質(zhì)，提高肉的風(fēng)味。傳統(tǒng) 的選育方式世代間隔時間長，已不能適應(yīng)市場需求，而采用豬冷凍精液 技術(shù)，可充分利用優(yōu)良種畜，縮短良種選育世代間隔時間，快速建立新 的適合市場要求的種豬和商品豬雜交繁育體系。同時，近千年的飼養(yǎng)史， 已在我國形成了數(shù)百種各具特色的地方品種，這是一份非常寶貴的財 產(chǎn)，今后畜牧業(yè)的競爭，相當(dāng)部份是遺傳資源，優(yōu)良基因利用的競爭， 但近年國外豬種的引進(jìn)雜交，已使我國有相當(dāng)數(shù)量的地方品種滅絕或面 臨滅絕，而采用豬精液冷凍保存技術(shù)可有效保存我國地方豬種質(zhì)資源， 具有不可估量的社會意義和效益。

雖然草食家畜精液超低溫(-196℃)冷凍保存技術(shù)已在現(xiàn)代化畜牧 生產(chǎn)、種質(zhì)資源保存中發(fā)揮著重要作用，并產(chǎn)生了顯見的經(jīng)濟和社會效 益。但豬冷凍精液一直難以在生產(chǎn)中大范圍推廣應(yīng)用，其原因有兩個， 一是豬精子細(xì)胞質(zhì)膜中膽固醇與磷脂比率顯著低于草食動物，在冷凍過 程中精子膜的離子通透性增強，脂類物質(zhì)流失，導(dǎo)致凍精活率低、受胎 率低。二是豬精子在冷凍過程中常受到自由基和氧化應(yīng)激的侵害，從而 影響豬精子冷凍后活率和受精能力。自由基是細(xì)胞內(nèi)正常代謝產(chǎn)生的，生 物體內(nèi)含有天然的抗氧化劑(自由基清除劑)以中和自由基的毒副作用。 正是在這些抗氧化劑的調(diào)節(jié)下，體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和消除處于一種動態(tài)平 衡中。但是，在常規(guī)的豬精液冷凍稀釋液中上述抗氧化劑的水平低于體內(nèi) 水平，并且在精子冷凍前的稀釋平衡過程中，不可避免地暴露于空氣，而 空氣中的氧氣濃度高于生殖道內(nèi)氧氣濃度(20％VS.7％)，加上體外操 作時光線和稀釋液中金屬離子的影響，使得冷凍時精子內(nèi)自由基水平增 加，打破了氧化-抗氧化的平衡狀態(tài)，導(dǎo)致精子氧化應(yīng)激損傷。因此，篩 選新的冷凍保護(hù)劑以提高冷凍后精子活率已成為豬精液冷凍研究領(lǐng)域的 熱點。

谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的含有巰基的非蛋白三 肽，具有較強的抗氧化作用，能夠消除超氧陰離子和過氧化氫等自由基。 它是組織細(xì)胞中主要的非蛋白巰基化合物，是谷胱甘肽過氧化物酶和谷胱 甘肽S-轉(zhuǎn)移酶兩種酶類的底物，為這兩種酶分解過氧化氫所必需，能穩(wěn) 定含巰基的酶。對于谷胱甘肽的研究已有文獻(xiàn)報道。CN100455592C、 CN100503837C、CN1164737C、CN1325511C、CN1313597C、 CN100360679C等多種專利申請公開了谷胱甘肽的制備方法。 CN1185008C、CN100435793C等多種專利公開了谷胱甘肽用作藥物的用 途。但到目前為止，尚未見有關(guān)谷胱甘肽用于家畜繁殖技術(shù)領(lǐng)域，特別是 用于豬精液冷凍保存的報道。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種可降低冷凍對精子的損傷、提高冷精活率的 含谷胱甘肽的豬精液冷凍保存液及其使用方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

谷胱甘肽在制備豬精液冷凍保存液中的應(yīng)用。具體的，所述的豬精 液冷凍保存液以適用于豬精液冷凍保存的稀釋液為基質(zhì)，所述豬精液冷 凍保存液中還含有2～6mg/mL的谷胱甘肽，5～11mg/mL的乳糖和10～ 30％(v/v)卵黃、5～10％(v/v)的甘油和0.5～2mg/mL的十二醇硫酸鈉。 一種含谷胱甘肽的豬精液冷凍保存液，所述的豬精液冷凍保存液以常 規(guī)適用于豬精液冷凍保存的稀釋液為基質(zhì)，所述豬精液冷凍保存液中還 含有2～6mg/mL的谷胱甘肽，5～11mg/mL的乳糖和10～30％(v/v)卵 黃、5～10％(v/v)的甘油和0.5～2mg/mL的十二醇硫酸鈉。

所述谷胱甘肽已有多種制取方法，屬于已知工藝和成熟技術(shù)，并已 有商品出售，較為成熟的生產(chǎn)廠家有美國Sigma-Aldrich公司、陜西融升 生物科技有限公司、重慶藥友制藥有限責(zé)任公司、湖州朗深系生物技術(shù)有 限公司等。本發(fā)明中所用谷胱甘肽由美國Sigma-Aldrich公司提供，純度 為98％。

具體的，所述豬精液冷凍保存液每1000mL組成如下：

谷胱甘肽????????2～6g

乳糖????????????50～110g